KC Schrempf 1

1. Aufgabe :

Auftrennung von Serumproteinen

2. Methode:

Trennung von Serumproteinen mittels Elektrophorese

· Proteine trennen sich bei Elektrophorese in verschiedene Fraktionen auf àalle Fraktionen: Gesamteiweiß

· Zur Auftrennung werden Proteine auf ei nTrägermaterial (Agarosegel) gebracht

· In alkalischen Puffer àProteine geben Protonen ab ànegative Ladung

· GleichstromàProteine wandern von Kathode zu Anode

· Wandergeschwindigkeit abhängig von Eigenladung, Molekülgröße und Trägermaterial

· Danach werden Proteine im Gel denaturiert und fixiert

· Färbung: mit Amidoschwarz /Säureviolett (Proteinfarbstoff)

· Entfärbung: überschüssiger Farbstoff wird abgewaschen

· endgültige Fixierung durch Trocknung

· Albumin: größter Anteil

· Alpha 1-Fraktion: Alpha-1- Lipoprotein (HDL), -„-Glykoprotein, -„-Antitrypsin

· Alpha-2 -Fraktion: Alpha-2-Makroglobulin, Coeruloplasmin, Haptoglobin

· Beta-Fraktion: Hämopexin, Transferrin, Beta-Lipoprotein (LDL), Komplement

· Übergang ß-y: IgA -AK , Fibrinogen

· Gamma-Fraktion: IgM, IgG-AK

Albumin

55,8-66,1

Alpha-1-Globuline

2,9-4,9

Alpha-2-Globuline

7,1-11,8

Beta-Globuline

8,4-13,1

Gamma-Globuline

11,1-18,8

· Luftblasen

· Zu viel Probenmaterial

· Auftrennzeit nicht beachtet

· Färbefehler

· Falsche Auftragsstelle

· Verdünnung bei Serumelektrophorese durchgeführt

1. Aufgabe:

Eiweißmessung in Serum

2. Methode:

Colorimetrischer Test, Biuret Methode

· Zweiwertiges Kupfer reagiert in alkalischer Lösung mit Peptidbindung der Eiweiße zu purpurfarbenem Komplex

· Mit Na-K-Tartrat wird Ausfällung von Kupferhydroxid, mit Kaliumiodid die Autoreduktion des Kupfers verhindert

· Farbintensität direkt proportional zur Eiweißkonzentration, die photometrisch gemessen wird