Vorlesung 3

Wechsel der anomeren Konfiguration von α-D-Glc zu β-D-Glc

UDP-α-D-Glc von Glukosyltransferase auf Ceramid unter Abspaltung von UDP -> Ceramid-β-D-Glc

vorweg Isomerase, die UDP-α-D-Glc in UDP-α-D-Gal umwandelt

dann wie Biosynthese von Laktose, auch hier wieder Umwandlung von α-D-Gal zu β-D-Gal

je nach Glykosyltranferasen in einer Zelle Verlängerung von Lc2Cer in Richtung Ganglio-, Globo-, Lakto- und oder Neolakto-Serie

verschiedene Zelltypen unterscheiden sich hinsichtlich ihrer GSL-Zusammensetzung, häufig Zelltyp-spezifische GSL-Ausstattung

Tri- und Tetrahexosylceramide der 4 GSL-Familien häufig Rezeptoren für Toxine und Bakterien

Ganglio-Serie:

• Galβ1-3GalNAcβ1-4Galβ1-4Glcβ1-1Cer

  ->Gangliotetraosylceramid, Gg4Cer oder Gg4

Globo-Serie

• GalNAcβ1-3Galalpha1-4Galβ1-4Glcβ1-1Cer

  -> Globotreaosylceramid, Gb4Cer oder Gb4

Lakto-Serie

• Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer

  -> Laktotetraosylceramid, Lc4Cer oder Lc4

Neolaktoserie

• Galβ1-3GlaNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer

  -> Neolaktotetraosylcerami, nLc4Cer oder nLc4

GSL der Globo-Serie Rezeptoren für pathogene Bakterien und deren Toxine

terminal sialyliert, wobei Sialinsäure mit terminalen Galaktose der Neolaktotetraosylceramide in α2-3 und α2-6 vorliegen kann

systematischen Bezeichnungen lauten IV^3Neu5Ac-nLc4Cer und IV^6Neu5Ac-nLc4Cer, römische Zahl der Zucker vom Ceramid aus gezählt, an den gebunden und Exponent das C-Atom der Galaktose

Ganglioside in der Vorlesung allgemein für sialylierte GSL verwendet

genannten Ganglioside potentielle Rezeptoren für Influenza A-Viren

Trennprinzip: Trennung nach Polarität

polare, stationäre Phase: Kieselgel-60

unpolare, mobile Phase: Laufmittel (Chloroform/Methanol/Wasser)

Rf-Wert: Rf=S/L

Probenapplikation: z.B. Rohlipidextrakte oder gereinigte GSL-Fraktionen entsprechend einer definierten Gewebefeuchtmasse oder Zellzahl

HPTLC-Platten: Grundkörper aus Aluminium, Plastik oder Glas

Beschichtung mit Kieselgel 60 (0,2mm Schichtdicke)

Probenaufgabe: halbautomatische Probenapplikation

Laufmittel für neutrale GSL: Chloroform/Methanol/Wasser (120/70/17)

Laufmittel für Ganglioside: C/M/W (120/85/20) + 3mM CaCl2, Alkalisierung: 1 bis 5 mM NH4OH anstelle von Wasser -> Trennung von Neu5Ac- und Neu5Gc-haltigen Gangliosiden

Färbungen:

• Orcinol färbt Zucker allgemein

• Resorcinol färbt Sialinsäuren