DC von Gangliosiden aus Säugerzellen
humane Ganulozyten ausschließlich Monosialoganglioside der Neolakto-Serie auf
menschliche Gehirn ausschließlich Ganglioside der Ganglio-Serie besitzt
durch densitometrische Quantifizierung mit Scanner kann relativer Gehalt der einzelnen Ganglioside innerhalb einer mittels DC getrennten Gangliosid-Mischung bestimmt werden
DC Overlay-Assay
nach Trennung des GSL-Gemisches durch Kieselgel dieses mit Kunststoff (Plexigum) fixiert (sonst löst sich Gel in folgenden Schritten auf)
mit Albumin abgesättigt, um unspezifische Bindungen von Proteinen zu minimieren
primärer Anti-GSL-Antikörper mono- oder polyklonal
für Nachweis von primärem Antikörper wird sekundärer Antikörper benötigt
Sekundärantikörper mit Enzym gekoppelt, das mittels zugehörigem Substrat eine Farbreaktion katalysiert -> Nachweis des gebundenen Primärantikörpers
DC-Trennung von GSL-Gemischen
Kunststoff-Fixierung des Kieselgels
Absättigung mit Albumin
primärer Anti-GSL-Antikörper
sekundärer Enzym-gekoppelter Antikörper, der spezifisch für den Immunglobulin-Subtyp des primären Antikörpers ist
Substratzugabe (BCIP, Substrat für die alkalische Phosphatase
Laufverhalten von neutralen GSL
GSL treten als Doppelbanden auf, für menschliche Zellen bzw. Organe typisch
beruht auf Heterogenität des Ceramidteils der GSL: obere Bande die Lipidform mit langkettiger Fettsäure (üblicherweise C24), untere Lipidform mit kurzfettiger Fettsäure (üblicherweise 16)
Sphingosin dabei konstant (d18:1)
Anti-GSL Antikörper aus dem Huhn
Mensch und Huhn beide nicht in der Lage Neu5Gc zu synthetisieren
deswegen Huhn bestens geeignet, um Neu5Gc-spezifische Antiseren mit hohen Titern zu erzielen
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