Was bedeutet “semi-konservative” Replikation? Und wie wurde sie bewiesen und von wem?
Der Begriff "semi-konservativ" bedeutet, dass jedes neue DNA-Molekül, das während der Replikation produziert wird, jeweils die Hälfte der Original-DNA und die Hälfte von neu synthetisierten Nukleotiden enthält.
Meselson-Stahl-Experiment:
15n-Isotop haltiger Agarboden von e.coli zur DNA bildung genutzt, womit die DNA sehr schwer ist
Kolonie werden auf einen 14n-Isotop boden transferiert und teilen sich dort
DNA wird aufgereinigt
Es gibt die parential dna mit nur 15n -> schwer
semi konservativ mit halb 15n und 14n -> mittel
14n konservative replikation mit nur 14n-> leicht
Welche Enzyme sind an der Replikation beteiligt? Und welches dieser Enzyme verbrauche ATP?
Helikase verbraucht ATP
Primase
DNA-Polymerase
Ligase verbraucht ATP
Topoisomerase-II verbraucht ATP
Welche Probleme treten bei der Folgestrang-replikation auf? Und wie werden sie gelöst?
semi-kontinuierliche replikation der DNA-Polymerase ->Okasaki-Fragmente, die anschließend von der Ligase mit einander verbunden werden
Wie wird der RNA Primer aus dem fertigen Replikationsprodukt entfernt?
RNAse H
Wieso werden von der DNA Polymerase keine RNA Nukleotide benutzt?
Die Diskriminatortasche der Polymerase kann nur Nukleotide mit einer OH-Gruppe aufnehmen
Was ist die Aufgabe der Ringklemme? Und wie heißt sie im Eukaryoten?
Konzessivität der Polymerase (Stabilhaltung)
In Eukaryoten: PCNA
Welche funktionellen Untereinheiten hat die Polymerase I aus E. coli?
3´-5´Exonuclease
5´-3´Endonuclease
Was ist eine nicht translation? Und wozu dient sie im Labor?
Bei der Nick Translation wird ein DNA-Molekül zunächst in Gegenwart von Enzymen, die DNA-Polymerase und DNA-Ligase, in kleine Fragmente gespalten. Diese Fragmente enthalten kleine Lücken oder Nicks, die von der DNA-Polymerase repariert werden, indem neue Nukleotide hinzugefügt werden. Die DNA-Ligase fügt dann die Fragmente wieder zusammen, um ein neues, intaktes DNA-Molekül zu bilden.
Wenn markierte Nukleotide hinzugegegebn werden, kann man DNA-Abschnitte markieren
Diese Markierungen können als Sonden verwendet werden
Welche Polymerasen sind an der Replikation mit Eukaryoten beteiligt?
PCNA, RPA, Pol alpha, Pol epsilon
Wie arbeiten Tpopisomerasen?
Was ist der zwei-Tore-Mechanismus
Topoisomerase I führt Einzelstrangbrüche durch, wober die Spannung der coiled DNA reduziert wird.
Topoisomerase II füht Doppelstrangbrüche durch und kann Spannung unter ATP-Verbracuh redizieren oder addieren
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