Serum 1:50

50µl Serum + 2,45ml PBS

Kontrollserum 1:10 (1:5 vorverdünnt)

50µl Kontrollserum + 0,45ml PBS

Positivkontrolle

Kontrolle Testablauf, bekannter Titer

Kontrolle der AG-Agglutinationseigenschaft

Bearbeiten wie Probe

AG-Kontrolle

50µl AG + 50µl PBS

Kontrolle auf Spontanagglutination

Reaktionsbild = Sedimentation

grobe Fehler im Versuchsansatz (Verdünnungs-/Pipettierfehler, Plasma statt Serum, falsche Inkubationsbedingungen,…)

Dichte der AG-Suspension falsch (AG-Lösung nicht gemischt)

Spontanagglutination

Änderung oder Verlust der AG-Agglutinationseigenschaft

Pos.: Agglutination

Neg.: Sedimentation

Titer: max. Serumverdünnung mit Agglutination

Titerangabe: Serumendverdünnung

Referenzbereich:

Neg.: < 1:200

Pos.: ≥ 1:200

Mit Widal werden IgM und IgG-AK bestimmt, nicht IgA

Nur Akutdiagnostik mittels Titerdynamik möglich (4-facher Titeranstieg, 10-14d)

Chronische oder postinfektiöse immunpathologische Reaktionen zegien eine spezifische IgA-Persistenz. Diese ist mit Widal nicht detektierbar -> IgA/IgG mit Immunoblot

Kreuzreaktionen beachten (Brucellen, andere Enterobacteriaceae, Stenotrophomonas, Vibrio cholerae,…)

gegen Yersinia enterocolitica [O:3; O:9], Yersinia pseudouberculosis [T:1]

passende Yersinien-Bakteriensuspension

Agglutination

1) Serum 1:50 in PBS verdünnen

2) Verdünnungsreihe in Mikrotiterplatte 1:50 - 1:6000 in 50µl PBS anlegen

3) +50µl AG -> Endverdünnung 1:100 - 1:3200

4) Inkubation: 37°C/16-20h/feuchte Kammer

1) vermeiden des Prozonenphänomens, diagnostischer Bereich

4) AG-AK-Komplexbildung

-> Yersinia-AK binden an passendes AG -> Agglutination bildet sich

Wenn keine spezifischen AK vorhanden sind sedimentiert das AG -> Knopfbildung (Sediment)