Serumverdünnung 1:100

75µl * 8 = 600µl -> 1000µl

10µl Serum + 990µl Imidazolpuffer

H₂O₂

2ml - 3,3µl A.d.

1996,7µl A.d. + 3,3µl H₂O₂ -> 1:600

-> 0,05% H₂O₂

Positivkontrolle: Kontrolle Testablauf, bekannter Zielwert

behandeln wie Probe

grobe Fehler im Versuchsansatz (Verdünnungs-/Pipettierfehler, Plasma statt Serum, falsche Mikrotiterplatte, falsche Inkubationsbedingungen,…)

DNA-haltiges Substrat nicht vollständig gelöst

AG nicht durch rütteln gelöst

Pos.: blaue Verfärbung im Well

Neg.: rote Verfärbung im Well

abgelesen wird die letzte Vertiefung mit positivem Reaktionsbild -> blau

Referenzbereich:

Erwachsene pos ≥ 200 IE/µl

Kinder pos ≥ 300 IE/µl

Wird in Kombination mit Anti-Streptolysin-O-Test bewertet

-> ASL Titer steigt innerhalb einer Woche nach Infektion an

-> ASDB Titer steigt später an, ist aber länger nachweisbar

Gruppe C + G Streptokokken können ähnliche Folgeerkrankungen hervorrufen und führen ebenso zu erhöhten ASL und ASDB Werten

Anti-Streptokokken_DNase B

Streptokokken-DNase B

Neutralisationsreaktion

1) ADN-Substrat in 3,5ml A.d. lösen, 10 min stehen lassen, gut mischen, muss vollständig aufgelöst sein

2) Serumvorverdünnung 1:100 in Imidazolpuffer

3) 75µl in alle Wells des Streifens pipettieren

4) 1min leicht schütteln um AG zu lösen

5) Inkubation 15min/37°C

6) 75µl ADN-Substrat zugeben

7) Inkubation 30min/37°C + 30µl 0,05% H2O2, 2h/37°C

AG befindet sich am Röhrchenboden und wird gelöst. Bei Vorhandensein von Anti-Strep-DNase B in der Probe bildet sich AG-AK-Komplex und wird dadurch neutralisiert. Sind keine spez. AK in der Probe wird AG nicht neutralisiert

ADN-Substrat enthält mit Toluidinblau gefärbte DNA

Nicht neutralisiertes AG kann die DNA lysieren -> Rotfärbung = neg. RB

Neutralisiertes AG kann die DNA nicht lysieren -> Blaufärbung bleibt erhalten = pos. RB