Benennen Sie die Haupteigenschaften von Antigenen
Fremdkörper, die die Produktion von Antikörpern mit spezifischer Reaktivität auslösen
Erklären Sie den Begriff “Epitop”
Molekülabschnitt auf einem Antigen, der zur variablen Region (Paratop) eines Antikörpers passt
Bestandteile des IgG Moleküls
Warum ist jeder AK mindestens bivalent?
Da er mindestens zwei Bindungsstellen für unterschiedliche Antigene besitzt
Was bedeutet Kreuzreaktivität?
Die Bindung eines Antikörpers an zwei unterschiedlich Antigene, die identische oder ähnliche Epitope besitzen
Beschreiben Sie in Stichworten die Herstellung von polyklonalen Antikörpern
Immunisierung eines Tiers -> Antiserum
Die B-Zellen werden aktiviert und differenzieren zu Plasmazellen, die AK produzieren
Die AK erkennen unterschiedliche Epitope, da die AK von verschiedenen Plasmazellen im Tier gebildet werden
Welche Vorteile haben polyklonale Antikörper gegenüber monoklonalen Antikörpern?
Erkennen mehrere Epitope, da die Antikörper von verschiedenen B-Zellen im Tier gebildet werden
Sind daher weniger anfällig bei Veränderungen am Epitop
Polyklonale Seren sind preiswert in der Herstellung
Welche Nachteile haben polyklonale Antikörper gegenüber monoklonalen Antikörpern?
Aufgrund der Verschiedenheit der Antikörper kann es zu unerwünschten Kreuzreaktionen mit ähnlichen Antigenstrukturen kommen
Reproduzierbarkeit ist durch die Herstellungsweise begrenzt
Beschreiben Sie in Stichworten die Herstellung von monoklonalen Antikörpern
Aktive Immunisierung mit spezifischen Antigenen
Entnahme der Milz mit den antikörperproduzierenden Plasmazellen
PLZ werden mit Myelomzellen fusioniert -> Hybridomzellen
Kultivierung und Vermehrung des richtigen Hybridstammes. Die Hybridomzelle produziert nur einen AK, der gegen ein ganz bestimmtes Epitop gerichtet ist
Welche Vorteile haben monoklonale Antikörper gegenüber polyklonalen Antikörpern?
Erkennen nur ein Epitop eines AGs, daher sehr spezifisch
selten Kreuzreaktionen
keine chargenabhängigen Qualitätsschwankungen
der AK kann unbegrenzt hergestellt werden
Welche Nachteile haben monoklonale Antikörper gegenüber polyklonalen Antikörpern?
ggü. Veränderungen des Epitops (zB durch Fixierung/Denaturierung) wesentlich empfindlicher
sind teuer und aufwändiger in der Herstellung
Erklären Sie den Begriff konjugierte AK
AK die mit Markersubstanzen gekoppelt sind
Erklären Sie welche Substanz den Farbnachweis liefert, wenn enzymkonjugierte AK in einer Nachweismethode eingesetzt werden
Chromogen/Substrat wird durch Enzyme umgesetzt -> sichtbarer Farbkomplex
Erklären Sie warum bei einer Immunfluoreszenzmethode endogene Enzym- und Biotinaktivität im Gewebeschnitt nicht blockiert werden muss
Da die endogenen Enzyme die Fluoreszenzfarbstoffe nicht umsetzen können
-> kein Substrat das umgesetzt werden könnte
Wozu dienen die Waschschritte mit TBS-Puffer bei einer Immunmarkierung?
Entfernen ungebundener AK, sonst falsch positive Ergebnisse/Hintergrundfärbung
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