Serum 1:5 (1:4 vorverdünnt) -> Endverdünnung 1:20

20µl Serum + 80µl Diluent

Positivkontrolle

Kontrolle Testablauf, bekannter Titer, bearbeiten wie Probe

Serumkontrolle

25µl Serum 1:20 + 75µl nicht sensibilisierte Erys

Kontrolle auf unspezifische Agglutination (RB: Sedimentation)

Partikelkontrolle

1) 25µl Probenverd.puffer + 75µl nicht sens. Erys

2) 25µl Probenverd.puffer + 75µl sens. Erys

Kontrolle auf Spontanagglutionation (RB: Sedimentation)

grobe Fehler im Versuchsansatz (Verdünnungs-/Pipettierfehler, Plasma statt Serum, falsche Inkubationsbedingungen, Reagenziencharge nicht beachtet…)

Dichte der Erysuspension falsch (nicht aufgeschüttelt)

Platte erschüttert

Spontanagglutination

unspezifische Agglutination

Pos.: Hämagglutination gleichmäßig über den gesamten Boden des Wells verteilt

Neg.: Sedimentation

Titer: max. Serumendverdünnung mit Hämagglutination

Titerangabe: Serumendverdünnung

Referenzbereich:

neg.: < 1:80

pos.: ≥ 1:80

TPHA ist ein Suchtest. Positive Ergebnisse müssen mit einem spezifischeren Test bestätigt werden -> FTA-Abs-Test

Bei negativen Ergebnissen wird ein negativer Befund erstellt.

Kreuzreaktionen zu anderen Spirochäten-Infektionen beachten (Borreliose)

gegen Treponema pallidum (Syphilis)

T. pallidum auf Vogelerys

passive Hämagglution

Serum 1:20 in Probenverdünnungspuffer verdünnen

Verdünnungsreihe in Mikrotiterplatte 1:20 bis 1:2560 in 25µl Probenverdünnungspuffer

+75µl Antigen -> Endverdünnung 1:80 - 1: 10 240

Inkubation RT/mind. 45min/erschütterungsfrei

1) -> vermeiden des Prozonenphänomens

4) -> AG-AK-Komplexbildung, d.h. Syphilis-AK bindet an T. pallidum/Vogelerys. Es bildet sich eine Hämagglutination.

Wenn keine spezifischen AK vorhanden sind sedimentiert das AG/die Vogelerys -> Knopfbildung