Serum 1:100

10µl Serum + 990µl Probendiluent

Positiv- und Negativkontrolle (neg. ist gebrauchsfertig)

bearbeiten wie Probe, Kontrolle Testablauf mithilfe der Testkriterien

Standardserum (gebrauchsfertig)

bearbeiten wie Probe, aber Doppelwertbestimmung

grobe Fehler im Versuchsansatz (Verdünnungs-/Pipettierfehler, Plasma statt Serum, falsche Inkubationsbedingungen, Reagenziencharge nicht beachtet…)

Beschickung am Rührchenboden beschädigt

Chromogensubstrat nicht im Dunkeln gelagert und inkubiert (bei Gelbfärbung vor Verwendung Extiktion bei 405nm gegen A.d. messen -> > 0,25 -> Reagenz verwerfen)

Streifen ausgetrocknet

Waschvorgänge nicht korrekt eingehalten

Enzyminhibition durch Spülmittelreste

photometrische Auswertung bei 405nm

Testkriterien beachten

Mutterschaftsvorsorge, Überprüfung der Immunität

Referenzbereich:

keine Immunität < 10 IE/ml

Immunität vorhanden ≥ 15 IE/ml

Immunität fraglich 10-15 IE/ml

Diagnostik einer frischen oder kürzlich zurückliegenden Infektion durch Nachweis der Avidität möglich

Rötelnvirus IgG-AK

Rötelnvirus am Röhrchenboden fixiert

indirekter Enzymimmunoassay

Probe 1:100 in Probendiluent verdünnen

je 100µl in beschickte Röhrchen, LW auf A1

Inkubation 1h/37°C/Streifen zukleben

Waschen 4x 0,3ml

100µl Enzymtracer = anti-human-IgG/AP, LW auf A1

Inkubation 30min/37°C/Streifen zukleben/lichtgeschützt

+100µl Stoppreagenz

photometrische Messung bei 405nm

1.Inkubation: Röhrchen sind mit Rötelnvirus beschickt. Nach Zugabe der Probe binden evtl. vorhandene spaz. Rötelnvirus-AK an die AG. Keine Komplexbildung, wenn Probe negativ.

1.Waschen -> nicht gebundene Serumbestandteile werden entfernt

2.Inkubation: Anti-human-IgG bindet an gebundene Rötelnvirus-IgG-AK und merkiert diese mit AP. Keine Enzymmarkierung, wenn Probe negativ

2.Waschen -> nicht gebundne Anti-human-AK werden entfernt

3.Inkubation: Indikatorreaktion: AP hydrolysiert das Substrat, dabei entstehen Phosphat und gelbes p-Nitrophenol

Stoppreagenz -> Natronlauge erhöht pH-Wert. Dadurch wird AP inaktiviert un dsomit die Indikatorreaktion gestoppt

Messung -> Intensität der gelben Farbe wird gemessen. Diese verhält sich proportional zur AK-menge im Serum

1) MW des Standards

2) Abweichung der Einzelwerte vom MW (max. 20%)

3) Extinktion Substratleerwert (< 0,25)

4) Standard liegt im chargenspez. Gültigkeitsbereich

5) pos. und neg. Ko erscheinen pos. bzw. neg.

6) Auswertung der Proben