Was für Symptome sind hier zu sehen?
Chlorotische/nekrotische Lokalläsionen
-> Chlorotisch = Mangel an Chloroplasten
-> Nekrotisch = Abgestorben
Stauchung
Mosaik und Streifen
Flecken
a = Adernvergilbung
b = Adernverbänderung
c = Adernaufhellung
Ringflecken
Verschuppung der Rinde
Löcherung des Stamms
Blütenbrechung
Welche Größe haben Pflanzenviren ungefähr?
Ca. 20 nm
Wie können Viren identifiziert werden?
Licht- und Elektronenmikroskopie
Biotest
Nukleinsäure basierte Methoden
Protein basierte Methoden
Serologische Methoden
“Biologische” Methoden
Welches Mikroskop benötigt man, um Viren zu sehen?
Lichtmikroskopie geht bis 100 nm
-> Erkennung von Einschlusskörpern
-> Kann auf die Familie des Virus hinweisen
Bevorzugt ist das Elektronenmikroskop
Was für Nukleinsäuren können Viren enthalten?
Entweder DNA oder RNA Viren
Wie kann man Viren identifizieren anhand von Biotest?
Proben von Virus infizierter Pflanze entnehmen
Blätter verkleinern und in Wasser oder Puffer
Pflanzen mit Wasser inokulieren
Pflanzen wachsen lassen
Welche Methoden gibt es bei der Nukleinsäure basierten Methode?
Isolation und Amplifikation von Nukleinsäuren
PCR
Isothermale Amplifikation
-> Rolling Circle Amplifikation (RCA)
-> Recombinase-Polymerase Amplifikation (RPA)
Hybridisation
-> Southern-Blot
-> Northern-Blot
Wie können Nukleinsäuren von Viren Isoliert werden?
cDNA Synthese -> PCR -> Klonieren -> Analyse
Was macht man bei DNA Viren?
Immunocapture-PCR
Rolling-Circle-Amplifikation (RCA)
Was ist die Rolling Circle Amplifikation? (RCA)
Isothermale enzymatische Reaktion
Erzeugt einen Concatemer, der aus mehreren DNA Kopien besteht
Benötigte Komponenten:
-> DNA Polymerase
-> Primer
-> Zirkuläres DNA Template
-> dNTPs
Was macht man bei RNA Viren?
RT-PCR
qRT-PCR
Immunocapture-RT-PCR
Was ist die Rekombinase Polymerase Amplifikation? (RPA)
Isothermale cDNA Amplifikation (37°C-42°C)
Lässt sich kombinieren mit Fluoreszenz
Was kann die Direct RT-RPA?
Schnelle Erkennung von Potyviren von Pflanzenextrakten
Was gibt es für Protein basierte Methoden?
In vitro translation extract-based
In vitro translation “PURE”
Expression von viralen Proteinen
Sequenzierung von Proteinen
Detektion von Proteinen in vivo (Western-Blot)
Detektion von Proteinen mit ELISA
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