Ablauf köhlern beschreiben
Objektträger einlegen und Probe fokussieren
Feldblende und Aperturblende schließen und Kondensor justieren, sodass Kanten fokussiert
Zentrierung Feldblende durch Bewegung des Kondensors, danach Feldblende öffnen (Kanten nicht mehr sichtbar)
Einstellung der Aperturblende für Gleichgewicht zsw. Kontrast und Auflösung
Was ist die Linsengleichung?
1/f = 1/g + 1/b
f : Brennweite
g : Gegenstandweite
b : Bildweite
Was ist ein Kollektor und Kondensor? Welche Blenden beinhalten diese jeweils?
Kollektor: Beeinflusst Beleuchtungsbedingungen im Mikroskop besteht aus: Lichtquelle, Kollektorlinse, (Leucht)Feldblende
-> Bild der Lampe auf Ebende der Kondensorblende
Kondensor: Leitet Licht direkt auf Probe, besteht aus: Kondensorlinsen, Apertur-/Kondensorblende
-> Ebene der Leuchtfeldblende wird auf Probe projiziert
Was ist die Funktion der Leuchtfeld- und Kondensoraperturblende?
(Leucht)Feldblende - reguliert Größe des ausgeleuteten Feldes, Streulicht minimieren
Apertur-/Kondensorblende - reguliert Winkel des eintretenden Lichts, erhöht Tiefenschärfe (große/geschlossene Blende), aber verringert Auflösung
Gib den Aufbau/Abfolge von Linsen und Blenden eines Phasenkontastmikroskops von der Lichtquelle über das Präperat hin zur Netzhaut an
Köhlersche Beleuchtung eines Mikroskops mit Durchlicht-Hellfeld-Beleuchtung. Abbildungsstrahlengang.
Konjugierte Ebenen: A,
Leuchtfeldblende. B,
Präparateebene, Schärfeebene. C,
Zwischenbild. D, Retina des Beobachters.
Beleuchtungsstrahlengang. Konjugierte Ebenen: 1,
Lichtquelle. 2,
Kondensorblende, Aperturblende. 3,
hintere Brennebene des Objektivs. 4, Pupille des beobachtenden Auges.
Was ist der Abbildungsmaßstab?
B/G = b/g = A
B : Bildgröße
G : Gegenstandshöhe
g : Gegenstandsweite
A : Auflösung
Benenne die Buchtaben in der Abbildung
a) Parralelstrahl
b) Mittelpunkstrahl
c) Brennpunkstrahl
G - Gegenstandsgröße
g - Gegenstandsweite
B - Bildgröße
b - Bildweite
f - Brennweite
Was ist d0 und wie wird es als Formel definiert?
d ist der Abstand, den zwei Linien im Gitter min haben müssen, damit das Mikroskop diese noch als getrennt erkennt
d0 = 1,22 Lambda / 2 NAobj.
Lambda : Wellenlänge
NAobj. : Numerische Apertur des Objektivs
Warum Faktor 1.22 bei derAuflösung??
Der Faktor 1.22 entsteht durch das Rayleigh Kriterium
2 Hauptmaxima (Nullte Ordnung) noch gerade unterschiedlich, wenn das Max. 2. PSF auf das erste Minimum der 1. PSF fällt.
Wovon hängt die numerische Apertur ab?
Welche Werte nimmt die Apterur für Trocken- und Immersionsobjektive ein?
Die num Apertur ergibt sich aus dem halben maximalen Winkel eines Lcihtbündels, welches vom Objekt noch ins Objektiv gelangen kann.
ANobj = n * sin(alpha)
n : Brechungsindex
alpha : Öffnungswinkel
AN Trockenobj.: < 1 (AN = 1 -> Winkel von 180°)
AN Immersionsobj.: > 1, da n Flüssigkeit >1
Wie funktioniert das Jablonski Diagramm?
Wie ist die Formel für den Stokes shift?
Was ist der Aufbau eines Fluoresenzmikroskops?
Was ist die Formel für die Bildpixelgröße?
What is it callen when fluorescent dyes absorb light of a particular wavelength and emit with a characteristic longer wavelength
Stoke’s shift
Which cellular structures do you want to identify?
Nucleus, Actin and Vinculin
▪ Which primary/secondary antibody combinations do you intend to use?
Anti-Vinculin Antibody (1st AB), Novex Goat anti-Mouse IgG with
Alexa488 (2nd AB)
▪ Which dyes do you need to label the structures?
• DAPI (4′,6-diamidino-2-phenylindole), Phalloiden-Tritc,
Was ist der Sinn von Köhler Beleuchtung?
Adequate und gleichmäßige Beleuchtung von undurchsichtigen Präperaten
What does tween do?
It makes a membran permeable (Tween is a tensid)
Wie funktioniert direktes Staining?
Molekül, welches an Zielstruktur bindet ist gleichzeitig Fluorophor
z.B. DAPI bindet direkt an DNA und ist ein Fluorophor
Wie funktioniert indirektes Staining?
primärer AK : Anti Vinkulin (Maus AK)
sekundärer AK : Anti Mau-AK (—> gegen unspezifische Bindungen)
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