Was ist das Ziel des Versuches?
mechanischen Eigenschaften von Teilen des Cytoskeletts, in diesem Fall von Aktin, untersuchten
—> Dabei wird die Viskosität von Aktin-Netzwerken bei verschiedener Konzentration und zu verschiedenen Zeiten nach dem Start der Polymerisation der Aktin-Monomere betrachtet, einmal gemessen durch ein Kugelfallviskosimeter und einmal durch die spektrometrische Analyse von Fluoreszenz- markiertem Aktin
𝑓 der Reibungskoeffizient FORMEL angeben
𝑅: Radius der Kugel
𝜌s: Dichte der Kugel
𝑔: Erdbeschleunigung
𝜌m: Dichte des Gels
𝑓: Reibungskoeffizient
𝑢: Geschwindigkeit der Kugel
Was ist der Unterschied zwischen G- und F-Aktin?
globuläres (G) Aktin - Monomer (42kDa)
filament (F) Aktin - polymerisierte Aktinfilamente von 42nm Durchmesser
Welche Faktoren spielen eine Rolle bei der Bindung von G-Aktin an ein Filament?
Polarität des Filaments à Am Plus Ende des Aktin Filaments binden G Aktine
ATP & ADP Konzentrationen: ATP-G-Aktin binden schneller als als ADP-G-Aktin
Gleichung für die Viskosität
Hierbei ist 𝐾 der Korrelations-Faktor (0,000583),
𝜌+,-./ die Dichte des Fluids,
𝜌#'()*) die Dichte der Kugel,
𝑑0-!) der Durchmesser der Kapillare und
𝑑#'()*) der Durchmesser der Kugel.
NBD markiertes Aktien
Welche AS und welcher Farbstoff?
Dafür wurde die Aminosäure Lys372 mit dem Farbstoff 4- Nitrobenzol-2-oxa-1,3-diazol (NBD) markiert, in insgesamt in 10% der G-Aktin-Monomere.
Um welchen Faktor wird die Intensität erhöht, wenn ein NBD in das Filament eingebaut wird?
Wird ein solches Monomer dann in das Filament eingebaut, so erhöht sich die Intensität der Emission um den Faktor 2.5.
Somit lässt sich die Polymerisation von Aktin durch Messung der Intensität verfolgen (Detmers et al., 1981).
Kinetik der Polymerisation von Aktin - Graph
Womit steigt die Viskosität einer Aktin Lösung an?
Mit dem Polymerisationsgrad
𝐹m die Auftriebskraft und 𝐹s die Reibungskraft gleichsetzen mit der Gravitationskraft Fg
Hierbei ist 𝐹 die Auftriebskraft und 𝐹 die Reibungskraft. In Gleichung 1 lassen sich nun die verschiedenen Kräfte einsetzten, wobei man folgende Gleichung erhält
Wie berechnet man die auf die Kugel wirkende Kraft?
Die Geschwindigkeit der Kugel lässt sich durch den Weg und die Zeit bestimmen und hängt, dabei auch von der Viskosität der Flüssigkeit in der Kapillare ab. Die auf die Kugel wirkende Kraft𝐹 lässt sich wie folgt darstellen:
Welche Lösung wurde angesetzt?
47.4 μL G-Puffer
100 μL 10x F-Puffer
837.21 μL G-Aktin
15.4 μL NBD-G-Aktin Daraus ergeben sich 1.0 mL einer 4 μM Aktin-Lösung. Die Fluoreszenz wurde im Anschluss für eine Stunde gemessen.
In was für einem Verlauf polymerisiert Akten?
Aktin polymerisiert mit einem sigmoidalen Kurvenverlauf, das heißt der Verlauf lässt sich in eine Anlaufphase, in eine Phase des schnellen Wachstums und in eine Gleichgewichtsphase einteilen. Auch lässt sich zu Beginn eine Reduktion der Intensität während der Anlaufphase erkennen.
Graph für velocity and friction force
Was für ein Trend hat die Viskosität?
Exponentieller Trend
Was sagt das Lambert Beersche Gesetz aus und wie lautet die Formel?
Schwächung der Strahlungsintensität beim Durchgang durch eine absorbierende Substanz
Stelle das Lambert Beersche Gesetz für die Konzentration um?
c = Extinktion / (Extinktionskoeffizienten * Schichtdicke)
Wofür steht NBD und wie sieht es aus?
4-nitrobenzol-2-osa-1,3-diazol
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