Wozu dienen Restriktionsendonukleasen, die in der Gentechnik eingesetzt werden, in Bakterien normalerweise? Welche Besonderheit weist die Erkennungssequenz dieser Restriktionsendonukleasen in der Regel auf?
• Verteidigungsmechanismus → schneiden virale DNA
• Bakterielle DNA wird methyliert, virale nicht
Welche Art von Gelmaterial wird im Wesentlichen für die Auftrennung von DNA in der Biochemie genutzt? Wodurch wird die DNA nach Ablauf des Gels sichtbar gemacht?
• Agarosegel
• Ethidiumbromid
Welches Enzym ist für die Verlängerung der DNA-Stränge in einer PCR notwendig? Welches Metallion wird in der Regel als Cofaktor eingesetzt, damit das Enzym arbeiten kann?
• DNA-Polymerase • Mg2+
Welches Enzym wird für die PCR verwendet? Welche Besonderheit hat es?
• Taq-Polymerase
• hitzebeständig
Wie bezeichnet man das DNA-Sequenzierverfahren nach Sanger noch? Auf welchen Mechanismus beruht das Verfahren?
• Kettenabbruch-Methode
• Beruht auf DNA-Verlängerung über DNA-Polymerase
Welche Moleküle werden in folgenden Verfahren jeweils nachgewiesen?
• Southern-Blot:
• Northern-Blot:
• Southern-Blot: DNA
• Northern-Blot: RNA
Welchen Bestandteil muss ein Plasmid (Klonierungsvektor) enthalten, damit es in Bakterien vermehrt werden kann? Wie selektiert man auf Bakterien, die das Plasmid aufgenommen haben?
• Ori (Origin of Replication)
• Ampicillin-Resistenz-Gen als Selektionsmarker
Nenne zwei Eigenschaften, die ein Expressionsvektor haben muss
• Selektionsmarker
• origin of Replication
• Promotor
• Terminator
• Multiple Cloning Site
• Ribosom Bindungsstelle
Welches sind die beiden essenziellen Schritte, über die Nukleinsäuren bei Northern- oder Southern-Blots in der Regel spezifisch sichtbar gemacht werden?
• Übertragung der im Gel aufgetrennten Nukleinsäuren auf eine Membran
• Detektion spezifischer Sequenzen mittels hybridisierender Sonden
Man kann die Expression von Genen durch verschiedene Verfahren künstlich unterdrücken. Was bewirkt ein siRNA-vermittelter Knockdown auf molekularer Ebene und mit welcher Methode wird die Wirkung des Knockdowns nachgewiesen?
• Unterdrückung der Expression durch Verbindung mit komplementären RNAs
(Meist nicht zu 100%)
• PCR
Welches Enzym ist für die Verlängerung der DNA-Stränge in einer Polymerase-Kettenreaktion (PCR) notwendig? Durch welche Eigenschaft zeichnet es sich besonders für die Anwendung in der PCR aus?
• DNA-Polymerase bzw. Taq-Polymerase
• Taq-Polymerase ist hitzestabil
Wie erfolgt bei der PCR die Denaturierung und welche Eigenschaft muss die taq-Polymerase daher haben?
• Denaturierung durch Gel-Erwärmung
• taq-Polymerase ist hitzebeständig
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