Coombs-Test

• z.B.: Rinderalbumin, Dextran

• Das Supplement beeinflusst die Erythrozyten dahingehend, dass die sich einander annähern

• Verringert das Zetapotential wodurch es zur Annäherung der Erythrozyten kommt

Erythrozyten haben negative Oberflächenladung, sie stoßen sich gegenseitig ab

• = Coombsserum

• Probe mit AHG inkubieren (AK gegen humane IgG-AK und Komplementbestandteile = Reaktionsverstärker)

• Wenn im untersuchten Blut AK gegen Erythrozyten vorhanden sind und diese entsprechend an den Erythrozyten gebunden vorliegen, binden die AK aus dem Coombs-Serum an das humane IgG und es kommt zur Agglutination

• monospezifisch: der Antikörper richtet sich nur gegen ein Antigen

• Polyspezifsich: der Antikörper richtet sich gegen mehrere Antigene, das heißt, er kann mehrere Antigene erkennen

• Monoklonal: alle Antikörper wurden von demselben B-Zell-Klon hergestellt, richtet sich gegen 1 Epitop

• Polyklonal: die Antikörper wurden von verschiedenen B-Zell-Klonen hergestellt, richten sich gegen verschiedene Epitope

Der DCT ist eine Untersuchung, mit der eine Beladung der Patientenerythrozyten bereits in vivo mit IG oder Komplementfaktoren nachgewiesen werden kann

• Erythrozyten der Blutprobe werden zuerst gewaschen, um Plasma und unspezifisch angelagerte Immunglobuline zu entfernen und dann mit Antihumanglobulin inkubiert. Ohne die Waschprozedur wird der Test in der Regel falsch positiv

• Zunächst polyspezifische AHG, enthält AK gegen IgG und C3d, ist dieser positiv, dann…

• … DCT monospezifisch : IgG positiv-> Transfusionszwischenfall, Mhn, Wärme-AK; C3d positiv-> Komplement, Kälte-AK, Medikament

Er dient dem Nachweis von Antikörpern, die frei im Plasma zirkulieren, also nicht an Erythrozyten gebunden sind

• Erfolgt in 2 Schritten (Karte) und 3 Schritten (Röhrchen zusätzlich RT), darauf beruht auch die Namensgebung “indirekt”.

• Zuerst inkubiert man das zu untersuchende Plasma bei 37 Grad (+Supplement) mit definierten Testerythrozyten

• Falls darin AK enthalten sind, kommt es zur Bindung an die Testerythrozyten

• Im 2. Schritt wird das AHG hinzugegeben

• Bei positivem Befund kommt es zur Agglutination

Zur Erkennung von Allo- und Autoantikörpern

• Plasma des Patienten wird gegen 2 oder 3 Testerythrozytensuspensionen der BG 0 im indirekten Antihumanglobulintest (indirekter Coombstest) getestet

• AKS ist Bestandteil der Verträglichkeitsprobe, wenn Blutprobe des letzten AKS älter als 3 Tage ist (Tag der Abnahme + 3 Tage)

• Testerythrozyten mit transfusionsrelevanten AG, die wichtigsten in homozygoter Form

• Negative AHG-Teste im Röhrchen mit sensibilisierten Testzellen (AK-beladen) überprüfen (Checkcells)

Der Coombstest ist ein diagnostisches Verfahren zum Nachweis von Antikörpern gegen Erythrozyten.

Er wird bei Verdacht auf durch Antikörper bedingte Hämolyse (z.B. Autoimmunhämolytische Anämie, Rhesus-Inkompatibilität) angewendet.

Der Coombstest weist Antikörper nach, die für sich alleine keine Agglutination von Erythrozyten verursachen können. Es handelt sich um Antikörper der Klasse IgG.

Coombs-Serum wird aus dem Serum von Kaninchen gewonnen, welche gegenüber humanen Antikörpern der Klasse IgG immunisiert worden ist.

-> ist ein Pool von mit IgG sensibilisierten (beladenen) Erythrozyten zur Bestätigung der Validität eines negativen AHG Tests

Testprinzip:

Checkcell werden zu allen negativen AHG Testen gegeben. AHG, das in einem AHG Test ausreichend gewaschene Erythrozyten nicht agglutiniert , sollte reaktiv und damit in der Lage sein, Checkcells zu agglutinieren.

Negative AHG Ergebnisse sind nur brauchbar, wenn ein wirksames AHG im Röhrchen mit ausreichend gewaschenen und nicht sensibilisierten Erythrozyten hinzugegeben wurde.

Wenn das AHG:

• inaktiviert wurde durch verbliebene Serumglobuline nach ungenügendem Waschen der getesteten Erythrozyten

• Inaktiviert wird durch Reagenzien Kontamination vor dem Test

• Nicht in das Testsystem getropft wurde

Nachweis mütterlicher Antikörper auf den Erythrozyten des Kindes

• Abklärung AIHA und Differenzierung in Kälte- und Wärmetyp

• Auto-AK

• Mhn

• Hämolytische Transfusionsreaktionen

• Fehltransfusionen

• AKS

• Antikörperdifferenzierung

• SVP

• Mutterschaftsvorsorge

• Durchführung bei positivem AKS

• Mehr als 8 Testzellen

• Grundsätzlich gilt, dass AK in der Regel von transfusionsmedizinischer Bedeutung sind, wenn sie bei 37 Grad reagieren und /oder im ICT nachweisbar sind