Biburger

      -Epitope: Molekulare Strukturen bzw. Molekülabschnitte eines Antigens, die eine   spezifische Immunantwort auslösen können

     -Antigene: Strukturen die vom Immunsystem als fremd erkannt werden

    -Antiseren erkennen meist mehrere verschiedene Epitopeauf dem Antigen ->   polyklonale Antikörper

    -Monoklonale Antikörper sind spezifisch für einEpitop auf einemAntigen

    -Monoklonale Antikörper können in beliebiger Menge hergestellt werden

- offenes Pangenom bspw. bei Bacillus thuringiensis/Bacillus cereus-Gruppe®Artgrenzen verwaschen je mehr Genome man sequenziert

Ein offenes Pangenom tritt auf, wenn in einer taxonomischen Abstammungslinie die Anzahl neuer Genfamilien ständig zunimmt und diese Zunahme nicht asymptotisch zu sein scheint, unabhängig davon, wie viele neue Genome dem Pangenom hinzugefügt werden. Escherichia coli ist ein Beispiel für eine Art mit einem offenen Pangenom.

- geschlossenes Pangenom bspw. bei Bacillus anthracis (Milzbranderreger)®kaum Variation

Ein geschlossenes Pangenom tritt in einer Abstammungslinie auf, wenn nur wenige Genfamilien hinzugefügt werden, wenn neue Genome in die Pangenom-Analyse aufgenommen werden und die Gesamtzahl der Genfamilien im Pangenom für eine Zahl asymptotisch zu sein scheint . Es wird angenommen, dass Parasitismus und Arten, die Spezialisten in einer ökologischen Nische sind, dazu neigen, geschlossene Pangenome zu haben. Staphylococcus lugdunensis ist ein Beispiel für kommensale Bakterien mit geschlossenem Pangenom.

➢ Polyklonaler AK: erkennen mehrere verschiedene Epitope auf einem Antigen (Antiserum)

➢ Monoklonale AK: sind spezifisch für ein Epitop auf einem Antigen

➢ Konformationsepitop

➢ Lineares Epitop

1) Antigen auf Mikrotiterplatte auftragen

2) Erlauben von Proteinadsorption und blockieren unbesetzter Stellen mit neutralem Protein

3) Antikörperlösung (Hybridomüberstand) in jede Vertiefung geben

4) Hinzufügen von HRP- oder AP-konjugierten sekundären Antikörper in jede Vertiefung und es entwickelt sich eine kolorimetrische Reaktion mit dem geeigneten Substrat

5) Extinktion im Spektrophotometer mit geeignetem Filter und quantitativen relativen Antigenspiegeln ablesen

➢ Western Blotting

➢ Prinzip:

1) Auflösen von Proteinproben auf SDS-PAGE

2) Elektrophoretische Übertragung von fraktionierten Proteinen vom Gel auf die PVDF-Membran

3) Blockieren der Membran mit neutralem Protein (BSA oder Milchkasein)

4) Inkubieren der Membran mit dem für das Zielprotein spezifischen primären Antikörper

5) Inkubieren der Membran mit HRP-markiertem sekundärem Antikörper, der für den primären Antikörper spezifisch ist

6) Inkubieren des Blot mit chemilumineszentem HRP-Substrat und Belichten des Films.

ELISpot Methode

□ Ein monoklonaler Antikörper erkennt genau ein Epitop auf einem Antigen. (r)

□ Die Antikörper aus einem Antiserum aus der Ziege erkennen genau ein Epitop auf einem Antigen. (f)

□ Das Immunsystem generiert nur Antikörper gegen lineare Peptidstrukturen. (f)

□ Ein monoklonaler Antikörper kann in beinahe beliebiger Menge hergestellt werden. (r)

➢ Original DNA der zu untersuchenden Probe

➢ Zwei Primer

➢ DNA-Polymerase

➢ Desoxyribonukleosidtriphosphate

➢ Mg2+ Ionen