Welchen Durchmesser haben Zellkerne in der Regel? Lassen sie sich im Lichtmikroskop erkennen?
etwa 5 bis 10 Mikrometern.
ja ist möglich
Welches mikroskopische Verfahren müssten sie für die Erkennung von Ribosomen verwenden?
Elektronenmikroskop
Nennen sie drei mikroskopische Verfahren für die Untersuchung lebender Zellen.
Lichtmirkoskopie
Fluoreszenzmikroskopie
STED-Mikroskopie
Konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie
Promotor-Reportergen-Konstrukt
(Genexpressionsanalyse) und ihr Nachweis
Beschreiben Sie kurz konfokale Laser Scanning Mikroskopie, wann wird sie angewednete?
Laserlicht wird genutzt, um Fluoreszenzfarbstoffe anzuregen.
Durch eine Lochblende kommt nur das Fluoreszenzlicht eines winzigen Teils der Probe in den Detektor (Mikroskop).
Bis zu einem Femoliter (1*1015 l) aktuelle Teilprobengröße???
„Anregungslicht nur in der aktuellen Fokusebene wirksam“
Das Objekt wird Schicht für Schicht durchscannt.
Rekonstruktion 3-dimensionaler Bilder.
Welche Voraussetzung hat die Fluoreszenzmikroskopie und was wird detektiert?
Erklären Sie kurz „Fluoreszenz“.
um welchhen Abstand ist das emittierte Licht im Vergleich zum zuvor absorbierten Licht energieärmer?
Spontane Emission von Licht beim Übergang eines elektronisch angeregten Systems in einen Zustand niedriger Energie.
Das emittierte Licht ist in der Regel energieärmer als das vorher absorbierte (20-50 nm Unterschied)
Welches Phänomen hat Ernst Abbe bei der Lichtmikroskopie beschrieben?
In einem Lichtmikroskop können zwei Objekte nicht mehr voneinander unterschieden werden, sobald ihr Abstand kleiner ist als die halbe Lichtwellenlänge ist (ca. 200 nm).
Schuld ist die Beugung des Lichts an den beiden Objekten, wodurch sie im Auge des Beobachters (bzw. Mikroskops) zu einem Objekt verschwimmen.
Was bedeutet STED Mikroskopie? Was bedeutet diese Form der Mikroskopie für die Unterscheidbarkeit von zwei Strukturen im mikroskopischen Bild?
Wie funktioniert diese form der Mikroskopue?
= Stimulated Emission Depletion Mikroskopie
Im Gegensatz zu herkömmlichen Fluoreszenzmikroskopen kann die STED-Mikroskopie jedoch Unterschiede zwischen Strukturen, die sehr nahe beieinander liegen, besser auflösen.
Welche im Gen vorhandenen Regulationselemente bestimmen die Transkriptionsaktivität eines Gens?
Promotoren
Enhancer, Repressor
Welche Möglichkeit gibt es, die Promotoraktivität eines Gens zu bestimmen?
Gene für fluoreszierende Proteine werden als Reportergene verwendet
Was sind Eigenschaften von Reportergenen?
leicht nachweisbar, z.B. durch enzymatische Reaktion
keine schädigenden Einflüsse auf die Zelle
Menge an Produkt bzw. Proteinaktivität zeigt Aktivität des Promotors an
Abhängig vom biologischen System
Nennen Sie drei Reportergene und eine typische Organismengruppe bei der sie eingesetzt werden können.
GFP (Green-fluorescence-proteine) —> Qualle Aequorea victoria
ß-Glucuronidase —> Reis
Luciferase —> großer Leuchtkäfer
Welche Strukturen lassen sich mit der Rasterelektronenmikroskopie erkennen?
tote Strukturen
Wenn Sie die Oberfläche von Pollen mit der Rasterelektronenmikroskopie (REM) untersuchen wollen, was müssten Sie vorher tun?
Beschichten Sie die Probe mit einer dünnen Schicht eines leitenden Materials, z.B. Gold, Graphit oder Platin, um die Probe für die Elektronenbeobachtung leitfähig zu machen.
Welche Voraussetzung stellt die Transmissions-Elektronenmikroskopie (TEM) an die zu untersuchende Probe? Welche Vorarbeiten müssen mit der Probe gemacht werden?
1. Probenvorbereitung:
a) Fixierung der Proteine (Glutaraldehyd, Osmiumtetroxid) (alternativ Cyrofixiering, -135°C)
b) Dehydratisierung (Ethanolreihen)
c) Einbettung: Acrylharze
d) Schneiden (Dünnschnitte z.B. 50 nm)
e) Kontrastieren: Uranylacetat, Bleicitrat
2. Die Elektronen durchstrahlen das Objekt
3. BeschleunigungderElektronen (80-120 kV bei biol. Proben)
4. DurchdieProbedurchtretenden Elektronen werden auf Schirm detektiert
Welche Schichtdicke hat ein typischer Schnitt im TEM?
50nm
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