Wie wird die PCR-Methode durchgeführt?
Denaturierung der DNA (=Auftrennen der Doppelstränge) in einem Heizblock (90*C)
Anlagerung der Primer (20-25 Nukleotide lang, Komplementär zum 3’ Ende der DNA (50-65*C))
Synthese des Doppelstrangs (Taq-Polymerase katalysiert die Synthese der DNA, Nukleotide werden am 3’Ende angelagert und zu einem Strang verknüpft (70*C))
Lösen der Taq-Polymerase vom DNA-Strang (Trennen der Doppelstränge, Vorgang kann wiederholt werden)
Wie funktioniert die Gel-Elektrophorese?
Übertragen der DNA auf Gel in einer Pufferlösung
Anlegen einer Spannung => DNA wandert zum Pluspol (je kürzer, desto schneller)
Sichtbar machen der Banden
Wie wird der Southern Blot durchgeführt?
Denaturierung der DNA durch alkalische Lösung
Southern Transfer: Übertragung der Banden auf Nitrocellulose Papier
Hinzugeben von Gensonden, die an die gesuchten Banden binden (Hybridisierung)
Sichtbar machen durch radioaktive Substanz/ Fluoreszenz Farbstoff
Was passiert bei der Sequenzierung?
= Bestimmung der Nukleotidabfolge
Denaturierung der DNA
Verteilung auf 4 Ansätze, Zugabe von Primer, Nukleotiden & Polymerase (Unterschiedliche Didesoxynukleotide pro Ansatz)
=> Lösen einen Kettenabbruch aus => unterschiedlich lange DNA Stränge
Was sind Restriktionsenzyme und wie funktionieren sie?
sie stammen aus Bakterien und dienen dort dazu, Phagen-DNA zu zerstören
Sie schneiden DNA an einer genau definierten Basensequenz (= Erkennungssequenz)
Mit oder ohne sticky ends: sauberer / versetzter Schnitt
wie wird der künstliche Gentransfer genannt und wie heißen die beiden natürlichen Wege?
Transformation
Natürlich: Konjugation / Transduktion
Was passiert bei der Ca-Cl-Methode für Gentransfer?
Einlegen der Bakterien in Salzlösung (12-24Std.), Membran wird durchlässig
Was passiert bei der Elektroporation als Methode für den Gentransfer?
Behandlung mit kurzen Hochspannungsstößen => Entstehung von Poren
Was passiert bei der Biolistik als Methode des Gentransfers?
Pflanzenzellen werden mit Wolframkügelchen auf denen DNA liegt beschossen
Was passiert bei der Lipofektion als Methode des Gentransfers?
Tierische Zellen begehen Endocytose mit einem Membranvesikel, in das DNA eingeschlossen ist
Was passiert bei der Mikroinjektion als Methode des Gentransfers?
DNA wird mit einer Mikrokanüle in den Zellkern Tierischer Eizellen injiziert
Wie werden Gene in der Epigenetik deaktiviert?
Durch Methylierung der Histone
Wie werden Gene in der Eligenetik aktiviert?
Durch Acetylierung der Lysin-Seitenketten
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