Übungszettel

1. Sterilisation: Prozess, bei dem alle lebenden Mikroorganismen, einschließlich Bakterien, Viren, Pilzen und Sporen, abgetötet oder entfernt werden. Das Ziel der Sterilisation ist es, ein Objekt oder einen Bereich vollständig frei von lebensfähigen Mikroorganismen zu machen. Sterilisation kann durch verschiedene Methoden erreicht werden, einschließlich Hitze (autoklavierter Dampf, Trockenhitze), Chemikalien (Ethylenoxid), Strahlung (Gammastrahlung, elektronische Strahlung) oder Filtration.

2. Desinfektion: Prozess, bei dem Mikroorganismen in einem bestimmten Bereich reduziert werden, um eine potenzielle Infektionsgefahr zu verringern. Im Gegensatz zur Sterilisation zielt die Desinfektion nicht darauf ab, alle Mikroorganismen vollständig zu beseitigen, sondern ihre Anzahl auf ein akzeptables Niveau zu reduzieren. Es werden verschiedene Desinfektionsmethoden eingesetzt, darunter chemische Desinfektionsmittel (wie Alkohol, Wasserstoffperoxid, Chlorverbindungen), Wärme (Dampfdesinfektion, Trockenhitzedesinfektion) und UV-Bestrahlung.

• Mykoplasmen aus dem Mund und Rachenraum

• Nachweis: PCR, SAU3A-Verfahren und PCR

• kleinste sich vermehrende Prokaryoten

• Tröpfcheninfektion des Mund- und Rachenraumes

• Verhalten:

  • körniges Aussehen

  • langsames Wachstum

  • neigen zu verstärkter Vakuolisierung

  • trüb

  • abgerundete Zellen mit vermindeter Adhärenz

  • Randflupreszenz am Cytoplasma

  • überstreut mit Puderzucker

• DMSO

• Schutz vor Eiskristallen, Dehydrataion, oxidative Schäden

• toxisch für zellen da es Zellfunktion einstellt

• Passendes Medium, TP,Luftfeuchtigkeit, pH-Wert, Sterilität und Adhärenz

• Zur Vermehrung, Lagerung für Diagnostik

• Fetales Kälberserum

• Besitzt Vielzahl Nährstoffen, GF, AK und Proteinen

• Dient auch als Puffer

• Def.: Beobachtung, das nach mehreren Teilungszyklen die Teilungsrate zurückgeht

• Betroffene Zellen: Zellen in frischem Medium, primäre menschliche Zellen

• Stammzellen und Krebszellen davon nicht betroffen

• Seneszenz durch Verkürzung der Telomere oder andere Faktoren wie:

  • DNA-Schäden

  • Oxidativer Stress

• Aufgaben:

  • Stabilisation = Kollagen

  • Z-Z-Kontakte = Multiadhäsionsmoleküle

  • Quellfähig = Hyaluronsäure

  
  

Zelladhäsionsmoleküle

• Integrine

• Selectine

• Cadherine

• IgCAMs

• Trypsin

• Trypsin/EDTA

• Accutase

• Alfazyme

Tote Zellen

1. Zellen inkubieren und vorbereiten

2. Assay-Medium vorbereiten (Substrat und Farbstoff)

3. Inkubation der Zellen mit Assay-Medium

4. Detektion des LDH-Signals

5. Messung des Signals

• Def.: Krebszellen verstoffwechseln Glucose noch schneller als primäre Zellen und verbrauchen dabei keinen Sauerstoff (aerobe Glykolyse)

• Grund ist Fehlfunktion der Mitochondrien

• 
  

Aktivität der Succinatdehydrogenase

• Zellen die direkt aus dem Gewebe isoliert werden

  1. gewebe

  2. Transfer in Zellkultur

  3. Primärkultur

  4. Subkultur

  5. Zelllinie

     5.1 unbegrenzt wachsende kontinuierliche Zelllinie

     5.2 begrenzt wachsende endliche Zelllinie

     5.3 kontinuerliche Stammzelle

1. Primärkultur

2. Subkultur

3. Zelllinie

   3.1 Klonen

   3.2 Immortalisierung

   3.3 Transformieren

   3.4 serielles Passagierem

• nah am physiologischen Echtzustand

• Anwendung: Expressionsanalysen

1. Telomer-Verlängerung: Während der DNA-Replikation werden die Telomere aufgrund des Endreplikationsproblems allmählich verkürzt. Wenn die Telomere eine bestimmte Länge erreichen, kann dies zu einer Aktivierung der Telomerase führen. Die Telomerase bindet an das Ende des Chromosoms und verwendet die RNA-Komponente (TR) als Matrize, um die fehlenden Telomersequenzen zu synthetisieren. Dadurch wird das Telomer verlängert und die Telomerlänge aufrechterhalten.

2. Reverse Transkription: Die katalytische Untereinheit der Telomerase, die eine reversen Transkriptase-Aktivität aufweist, nutzt die RNA-Komponente (TR) als Vorlage, um neue DNA-Sequenzen zu synthetisieren. Die Telomerase bindet an das 3'-Ende des Telomers und synthetisiert komplementäre DNA-Sequenzen, um das Telomer zu verlängern.

3. Wiederholte Aktion: Die Telomerase kann mehrere Runden der Telomer-Verlängerung durchführen, indem sie sich entlang des Telomers bewegt und kontinuierlich Telomersequenzen synthetisiert. Dadurch wird die Länge des Telomers aufrechterhalten und der Verlust von genetischem Material während der Zellteilung ausgeglichen.

• erhöhte Telomerase Aktivität

• unbegrenzte Zellteilungsfähigkeit oder Immortalisierung

• fehlt: begrenzung zellteilung und einletung seneszenz

• Mikroinjekton

• Membran Fusion

• Lipofektion

• Elektroporation

• Lentivire

• Calclium Phosphat

• Cyclibe: Variieren durch ihre Expression den ZZ

• CDK: Katalysieren Phosphorylierung von Proteinen und steuern ZZ

• Streng regulierte Expression durchSignale und Faktoren z.B GF, DNA-Schäden und zellulären Stress

• Proteinstabilität durch p21

• G2 Checkpoint

• G1 Checkpoint

• M-Phase Checkpoint

• Regulation der frühen G1 Phase und Regulation von g1 zu S Phase

• Reguliert druch CDK oder Tumorsuppressoren

• Aktiviert p21

• Cyline

• pRB

• H2A

• DNA Rezeptor

• Caspasen

• APAF1

• BCL2

• P107

1. Tumorsuppressorgene: Tumorsuppressorgene sind Gene, die normalerweise das Zellwachstum kontrollieren und die Entstehung von Krebs unterdrücken. Sie spielen eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der genomischen Stabilität und der Verhinderung unkontrollierter Zellproliferation. Mutationen oder Verlust von Tumorsuppressorgenen können zu einer Funktionsstörung führen, die zu Krebs führen kann. Ein bekanntes Beispiel für ein Tumorsuppressorgen ist das p53-Gen.

2. Onkogene: Onkogene sind Gene, die potenziell krebsauslösende Eigenschaften haben, wenn sie mutiert oder überaktiviert sind. Sie können das normale Zellwachstum und die Zellteilung fördern und zur Entwicklung von Krebs beitragen. Onkogene können durch verschiedene Mechanismen aktiviert werden, wie zum Beispiel durch Punktmutationen, Genamplifikation oder Chromosomentranslokationen. Ein bekanntes Beispiel für ein Onkogen ist das Ras-Onkogen.

• Entstehen durch ferie Radikale und GF

• Nicht mehr heilbar wenn Metastasiert

• Entwicklungssatdien:

  1. Erstmutation

  2. Aktivierung Proonkogen zu Onkogen

  3. Aktivierung Telomerase

  4. Zweitmutation

  5. Metastasiert und verliert Hülle

     
     

• chemo

• op

• bestrahlung

• bestrahlung mit ionischer Strahlung

• monoklonale AK/Immuntherapie

• RAS pathway angreifbar machen