Histologie Fr. Seiwert - Praxis

• Präparat

• Mikrotom

• Klinge

• Schnittdicke

• Mikroskopie

• Hilfsmittel

• Fehler- & Fehlerbehebung

• Ergebnisse

Organ, Herkunft

Name

(Datum)

*, S, R etc. Nr.

• 25 ml Benzo-Stammlösung in 25 ml MeZy abmessen und in 100 ml EK geben.

• 25 ml absolut reinster Ethanol in 25 ml MeZy abmessen, ebenfalls in 100 ml EK geben.

• Mischen.

• Es entsteht eine klare, rot-orangene Lösung.

• A.dest in 1L MeZy vorlegen,

• unter dem Abzug 10 ml Essigsäure mit 10 ml Stabpipette hinzupipettieren,

• auf 1 L mit A.dest auffüllen.

• Mit Parafilm verschließen und über Kopf mischen.

• Es entsteht eine klare, farblose Lösung unter Schlierenbildung.

8 ml Eisessig

792 ml A.dest

A.dest vorlegen in 1 L MeZy vorlegen.

• 70%igen Isopropanol in 50ml MeKo vorlegen

• 0,5 ml 37%ige Salzsäure, rauchend, unter dem Abzug mit Kolbenhubpipette hinzupipettieren

• Mit 70%igen Isopropanol auf 50 ml auffüllen

• Mischen

• 1 ml 37%ige Salzsäure rauchend

• 99 ml 70%igen Isopropanol

Weigert A: 36ml Isopropanol in 50ml MeZy abmessen und in 100 ml EK geben. 4 ml Weigert-Stammlösung mit Kolbenhubpipette hinzupipettieren und mischen. Es entsteht eine cognacfarbene Lösung.

Weigert B: A.dest in 20 ml MeKo vorlegen. 0,8ml Eisen(III)Chlorid (zunächst resuspendieren) mittels Kolbenhubpipette hinzupipettieren. Unter dem Abzug 0,2 ml 37%ige Salzsäure, rauchend mit Kolbenhubpipette hinzupipettieren. Mit A.fest auf 20 ml auffüllen und mischen. Es entsteht eine leicht gelbe, klare Lösung.

Weigert-Gebrauchslösung: Weigert B zu Weigert A in 100 ml EK geben und michen. Es entsteht eine dunkellila-schwarze Lösung, die Glas anfärbt.

0,06g Lichtgrün (fein pudrig, dunkelgrün) abwiegen und in 100ml EK geben. 60ml A.fest in 100ml MeZy abmessen und in EK geben. Unter dem Abzug 0,12ml konz. Essigsäure (Eisessig) mittels Kolbenhubpipette hinzupipettieren und mischen. Es entsteht eine waldgrüne Lösung unter Schlierenbildung.

• Start aus 70%igem Isopropanol

• 2x A.dest spülen

• HnE 15 Minuten

• 2x A.dest spülen

• MiKo -> ZK-ZP-Kontrast bewerten

• Ggf. Differenzieren mit HCl-Alkohol

• fließend bläuen in LW 15 Minuten

• 96% Ethanol, vergällt 5 Minten

• Benzopurpurin-Gebrauchslösung 10 Minuten

Nachbehandlung:

• 2x Iso absolut 2 Minuten

• 3x Xylole 3 Minten

• Eindecken mit Entellan

• Start aus 70% Isopropanol

• HnW 3 Minuten

• 2x A.dest spülen

• MiKo, ggf. differenzieren

• Fließend wässern in LW 15 Minten

• A.dest

• Ponceau-Säurefuchsin-Azophloxin 6 Minuten

• 1% Essigsäure 2x

• Phosphormolybdänsäure-OrangeG-Gem. 10 Minuten

• 1% Essigsäure

• MiKo (BGW entfärbt?)

• Lichtgrün 8 Minuten

• 1% Essigsäure

• A.dest Kurz

Nachbehandlung:

• AR absteigend

  • 2x 96% Isoprop 2 Minuten

  • 2x Iso abs 2 Minuten

• 3x Xylole 3 Minuten

• Eindecken mit Entellan

80ml Ethanol absolut in 100ml MeZy abmessen u in 200ml EK geben. 20ml A.dest in 25ml/20ml MeZy abmessen und hinzuschütten. Es entsteht eine klare farblose Lösung unter Schlierenbildung.

• Farbstoffe vor Gebrauch filtrieren

• OTs auf und ab bewegen

• Xylole 3x 1 Minute

Farblösungen und Zeit aufschreiben

“Durchführung nach Vorschrift”

• ZK: blau

• Zytoplasma

  • keratinisiert: rosa-orange

  • Superfizialzellen: rosa

  • Parabasal-/Intermediärzellen: blau-grün

• Erys: rot

• Mikroorganismen: blau-grün

• Trichomoaden: blau-grün

ZK: dunkelblau

Gewebe: orange-rot

• ZK: braun-schwarz

• BGW/Schleim: grün

• ZP: schwach orange - rot

• Erys: leuchtend rot

• Muskulatur: blass rot

• ZK: dunkelblau

• PAS-positiv: Knatsch Pink

0,5g Perjodsäure (weiß, kristallin) abwiegen und in 100 ml EK geben. 50 ml A.dest in 50ml MeZy abmessen und in EK geben. Mischen, bis Feststoff gelöst ist. Es entsteht eine durchsichtig farblos klare Lösung.

• 0,5 g Perjodsäure

• 50ml A.dest

• 0,1 g Eosin, gelblich

• 50 ml A.dest

• 1 Tropfen Eisessig

0,1g Eosin gelblich (pudrig, weinrot) abwiegen und in 100ml EK geben. 50ml A.erst in 50ml MeZy abmessen und in EK geben. 1 Tropfen Eisessig unter dem Abzug mit einer Pasteurpipette hinzugeben und mischen. Es entsteht eine leuchtend rot orangene, klare Lösung

• 10ml 10% Kaliumpyrosulfid

• 200ml Leitungswasser

• 10ml 1N HCl

1g Kaliumpyrosulfid (weiß, pudrig) abwiegen und in 500ml EK geben. 10 ml A.dest in 10ml MeZy abmessen und in EK geben. Mischen, bis Feststoff gelöst ist. Es entsteht eine klare farblose Lösung.

• 10% Kaliumpyrosulfid in 500ml EK ansetzen

• 200ml Leitungswasser in 200ml MeZy abmessen und in EK geben

• 10ml 1N HCl unter dem Abzug mit 10ml Stabpipette in EK pipettieren

• Es entsteht eine klare, farblose Lösung mit unangenehmen Geruch

Vorbehandlung:

• Xylole

• AR absteigend, Start aus 70% Isopropanol

Färbevorgang:

• 2x A.dest spülen

• HnE 15 Minuten

• 2x A.dest spülen

• MiKo

• Ggf. Differenzierung mit HCl-Alkohol

• LW: fließend bläuen 15 Minuten

• A.dest

• 0,2% Eosin, gelblich 7 Minuten

• A.dest Kurz

Nachbehandlung:

• AR aufsteigend

  • 96% Iso 2x 2 Minuten

  • Iso abs 2x 2 Minuten

• Xylole 3x 3 Minuten

• Eindecken mit Entellan

• 1% Perjodsäure 5 Minuten

• A.dest 2x

• Schiff’sches Reagenz 30 Minuten

  • im Dunklen inkubieren

  • Zurückfiltrieren mit Handschuhe

• SO2-Wasser 3x 5 Minuten

  • Hellendahl + Erweiterung

• LW: fließend wässern 15 Minuten

• A.dest

• HnE 5 Minuten

• A.dest

• MiKo

• Differenzierung mit HCl-Alkohol

• Fließend Bläuen in LW 5 Minuten warm

Nachbehandlung

• ZK: dunkellila

• Gewebe: rot-orange

• ZK: dunkellila

• BGW: rot

• Elastische Strukturen: blau-violett

• Muskulatur: gelb

5 ml Elastika-Stammlösung mit Stab- oder Kolbenhubpipette in 100ml EK pipettieren. 45ml HCl-Alkohol in 50ml MeZy abmessen und hinzugeben, gut mischen. Es entsteht eine dunkel violette Lösung, die flüssiger als Hämatoxylin ist.

42ml Iso absolut + 18ml A.dest

Vorbehandlung, Start aus 70% Isoprop

• Elastika-Gebrauchslösung 30 Minuten in Wärmeschrank

• 96% Isoprop (Differenzierung bis keine Farbwolken mehr abgehen)

• abs. Isoprop (Unterbrechnug Differenzierung)

• MiKo

• HnW 2 Minuten

• 2x A.dest spülen

• MiKo, ggf. Differenzierung

• LW: fließend wässern 15 Minuten

• A.dest

• Van-Giesson-Lösung 10 Minuten

• 2x A.dest spülen

Nachbehandlung

Resorcin-Fuchsin

• ZK: rot

• Gewebe: rosa

• Eisen 3+ positiv: blau

Mit Plastik arbeiten

30ml 1% HCl in 50ml MeZy abmessen und zu EK mit 2% Kaliumcyanoferrat II geben, mischen. Es entsteht eine klare, leicht gelbe Lösung.

A.erst in 50ml MeKo vorlegen. Mit Kolbenhubpipette unter dem Abzug 1,351 ml HCl 37%ig in 50ml MeKo pipettieren. Auf 50ml mit A.dest auffüllen und über Kopf mischen. Es entsteht eine klare, farblose Lösung.

Berechnung: 30ml x 0,02 = 0,6g

0,6g Kaliumcyanoferrat II (gelbes Blutlaugensalz, gelb, kristallin) abwiegen und in 100ml EK geben. 30ml A.dest in 50ml MeZy abmessen und in EK geben. Es entsteht eine klare, leicht gelbliche Lösung.

c1 x V1 = c2 x V2

V2 = 1% x 50ml / 37% = 1,351 ml

Vorbehandlung, Start aus 70% Isopropanol

• 2x A.dest spülen

• Ferrocyankalium-Gemisch 30 Minuten

• 2x A.dest spülen

• Kernechtrot-Aluminiumsulfat 10 Minuten

• 2x A.dest spülen

Nachbehandlung