Chromatographische Methoden
Planare:
DC
HPTLC (High performance thin layer chr.)
Säulen:
SC
HPLC (high performance liquid)
UHPLC (ultra HPLC)
SFC (Supercritical Fluid)
GC (GSC solid stationary/ GLC liquid stationary)
SC Theorie
trennung durch stat Phase (in zylindrischem Rohr)
unterschiedlich starke adsorption der Substanzen an festem stationärem Träger
präparativ
äußeres CHromatogramm (LAufzeit variiert, Strecke konstant)
Stationäre Phasen
Kieselgel (polar)
modifiziertes Kieselgel (unpolar)
Kieselgur (amorphes Kieselgel)
Al2O3 (neutral/basisch/sauer)
Cellulose (verteilungsphase, polar)
Polyamid (Umkehrphase, phenolisch)
optimale Fließmitteleigenschaften
nicht toxisch
leicht entsorgbar
keine Verschmutzungen
inert ggü Probensubstanzen und Sorbens
Dampfdruch nicht zu niedrig
gering viskos
Dreieck nach Stahl
Elutrope Reihe der mobilen Phase
Theorie DC
trennung durch stat Phase auf Platte
LM wandert durch Kapillarkräfte an festem feinporigem Trägermaterial aufwärts
geringer apparativer Aufwand, schnell, parallel
Reinheit, Identitätsüberprüfung mit Referenz
inneres Chromatogramm (Zeit konst, Strecke variiert)
Rf/ Rst
ß-Front
Fließmittelgemischen
Adsorption/ Verdunstung einer Komponente, vollst Entfernung —> ß-Front
bandenförmige Spots
Kammersättigung
Innenwände mit Filterpapier auskleiden
verhindert verdampfen von leichtflüchtigen Komponenten
Detektion
Azofarbstoffe
Durchführung SC
Kieselgel in mobiler Phase aufschlemmen, 10 min quellen lassen
watte anfeuchten, in Säule geben
Kieselgel darauf, überstehende mobile Phase ablassen, 10 min warten
Seesand drauf, Probe auftragen
Fließmittel dazu ( langsam, 15 TR pro min, ersten beiden Farbstoffe auffangen)
dritte Substanz mit reinem Methanol eluieren
Durchführung DC
Platte in 4 gleichgroße Platten schneiden
Auftrageorte markieren (1cm vom unteren Ende) RP NP beschriften
Substanz punktförmig mit Glas-Mikropipette auftragen
trocknen lassen
kammer sättigen, FLstand unterhalb Auftrageort
bis 1 cm vor Ende der Platte laufen lassen
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