Nach was werden Proteine bei der SDS-Page aufgetrennt?
Nach Molekulargewicht
SDS ummantelt Proteine -> alle negativ geladen
Was heißt PAGE?
Was sind die Vorteile?
Polyacrylamid-Gelelektrophorese
Höhere Trennschärfe, bessere Nachweisempfindlichkeit
Verhalten von Haptoglobin bei intravasaler Hämolyse
Fällt ab
Bei Hämolyse wird Hb aus den Erys frei, Hb bindet an Haptoglobin -> Konzentration sinkt
Markerprotein zur Diagnostik einer hämolytischen Anämie
Haptoglobin
Parameter für möglichst frühe Infektionsdiagnostik
Interleukin 6 (CRP und PCT erst später)
Messprinzip des Nephelometers
Messung des Streulichts
Durch welchen Effekt gibt es bei der Kapillarelektrophorese stärkere Banden?
Elektroosmotischer Fluss
(Elektroosmotischer Fluss zieht die Proteine zum Minuspol, Proteine sind im alkalischen Milieu negativ geladen -> Wanderung zum Pluspol)
-> zwei gegeneinander wirkende Kräfte bewirken bessere Auftrennung
Die exsudative Enteropathie geht mit erhöhtem intestinalem Eiweißverlust einher. Wie ist dieser Eiweißverlust messbar?
Alpha 1-Antitrypsin/Alpha-1-PI (wird während dieser Darmpassage nicht abgebaut)
Methode der Proteinbestimmung nach Lowry
Colorimetrisches Verfahren
Welche Proteinbestimmungsmethode ist mit der nach Lowry verwandt?
Biuret-Methode
Proteinbestimmungsmethoden
Kolorimetrisch
Farbstoffbindungsmethode
Direkte Messung (Absorption)
Was sind Bence-Jones-Proteine?
Leichtketten der Immunglobuline
Bei einem ELISA werden DetektionsAK benötigt, zB mit Luminol. Zu welcher Detektionsgruppe gehört Luminol?
Chemolumineszenz-AK
Was wird in welchem Blot nachgewiesen?
Western
Northern
Southern
Eastern
Western = Proteine
Northern = RNA
Southern = DNA
Eastern = Lipide, Kohlenhydrate
Bei einem Patienten ist der Peak der Albuminfraktion geteilt. Wieso?
Der Patient hat eine Bis-Albuminämie
Alpha-1-Antitrypsin ist Leitprotein für welche Erkrankung?
Exsudative Enteropathie
In der Elektrophorese eines Patienten fehlt nach Albumin eine Fraktion. Welches Protein fehlt und wie heißt die Erkrankung?
Alpha-1-Antitrypsin
Alpha-1-Antitrypsin-Mangel (Gendefekt)
Symptome: Belastungsatemnot
Voraussetzung für die Auftrennung der Proteine in der Elektrophorese
Alkalischer pH (sorgt für Ladung der Proteine)
Wie hängt die Wanderungsgeschwindigkeit der Proteine in der Elektrophorese vom Isoelektrischen Punkt und dem pH-Wert ab?
Je größer die Differenz zwischen dem isoelektrischen Punkt eines Proteins und dem alkalischen pH des Puffers, desto schneller ist die Wanderungsgeschwindigkeit des Proteins
Welches Elektrophorese-Verfahren wird in Kliniken oft verwendet, da es besonders schnell ist?
Kapillar-Elektrophorese (schnell und kann automatisiert werden)
2 Colorimetrische Verfahren zur Proteinbestimmung
Biuret und Lowry
Wie sehen die Beine des Patienten aus, wenn das Gesamteiweiß <5 ist?
Angelaufen; er hat kolloidosmtische Ödeme
In der Alpha-2-Fraktion der Elektrophorese läuft Haptoglobin. Was macht Haptoglobin physiologisch?
Es transportiert freies Hämoglobin zur Leber
Woran erkennt man ein Plasmozytom in der Elektrophorese?
Monoklonale Gammopathie
Was transportiert Coeruloplasmin?
Kupfer
Wie kann unterschieden werden, ob der Patient eine glomeruläre oder tubuläre Proteinurie hat?
Bei glomerulärer Proteinurie ist Albumin erhöht
Bei tubulärer Proteinurie ist alpha-2-Makroglobulin erhöht
Wie heißen die monoklonalen Leichtketten der Ig im Urin?
Bence-Jones-Leichtketten
Bis zu welchem Punkt wandern die Proteine in Gelen mit pH-Gradient?
Bis zum isoelektrischen Punkt
Was wird für eine Immunfixation benötigt?
Alkalisch gepuffertes Agarosegel
Streifen mit Antikörpern
Was bedeutet SDS?
Sodium-Dodecyl-Sulfat
In der Immunpräzipitation nach Heidelberger gibt es drei Bereiche. Welche?
1) AK-Überschuss
2) Äquivalenzbereich
3) AG-Überschuss
In welchem Bereich der Heidelberger Kurve können Werte bestimmt werden?
Im Bereich des AK-Überschusses
Wofür steht HAMA?
Humane anti-Maus-Antikörper
Beim EIA sind die Röhrchen mit Streptavidin beschichtet. Die AK binden an spezifische AG (aus dem Patientenserum). Was brauchen diese AK noch an ihrem Fc-Fragment?
Biotin
Vorteil und Beispiel für einen kompetitiven, homogenen Immunoassay
EMIT
Vorteil: es ist kein Separationsschritt erforderlich (keine Trennung zwischen fester und homogener Phase)
Welches Ig ist plazentagängig?
IgG
Was bedeutet ELISA?
Enzyme-linked-Immuno-Sorbent-Assay
Was bedeutet RIA?
Radioactive-Immuno-Assay
Was bedeutet LIA?
Lumineszenz-Immuno-Assay
Trennmöglichkeiten, um freies AG von gebundenem AG zu trennen
Coated tubes verwenden
Polyethylenglycol-Fällung
Doppel-AK verwenden
mit Magnetpartikeln
Über welches Fragment docken die AK an ein AG an?
Fab-Fragment
Fachbegriff für einen zweigipfligen Albumin-Peak?
Bisalbuminämie
Wie sieht die Elektrophorese bei einem Myelom aus?
monoklonale Gammopathie
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