Effluent
Flüssigkeit welche die Säule verlässt, wird analysiert
Eluent
mobile Phase
Chromatographische Analysemethoden Gemeinsamkeit
Trennung von Stoffgemischen
SÄule
Kernelement
Rohr aus Edelstahl
gepackt mit feinen Partikeln auf Basis von Kieselgel (stationäre Phase, können Säule nicht verlassen)
Trennung durch WW Analyt mit stationäerer Phase
Partikel
DM 1,9-10 µm
irregulär oder sphärisch
voll porös, semi porös (pellikular) oder unporös
Porengrößen: Makro, Meso oder Mikro
Wechselwirkungen
—> Retention und Selektivität gegeben durch unterschiedliche WW
DIspersionskräfte: unpolare Gruppen
Dipol-induzierter Dipol: polare Gruppen & Aromaten
Dipol-Dipol: unterschiedl polare Gruppen
Charge-Transfer: unterschiedl aromatische KWS
H-Brücken: Dipol-Dipol zw Protonendonatoren und -akzeptoren
Elektrostatisch: unterschiedl geladene funkt. Gruppen
Gleichgewicht
Analytenmol in mob Phase werden durch Fluss weitertransportiert
an stat Phase: behalten Position
WW bestimmen in welcher phase Mol befindet
können durch Wahl von mob & stat Phase gesteuert werden
Aufbau
Eluenten Aufbau
Entgaser, Quaternäre Pumpe, Binäre Pumpe, Uv Detektor
Chromatogramm
Parameter des Chromatogramms
Externe Kalibrierung
Durchführung mit Proben bekannter Konzentration
Einpunktkalibrierung: ein Standard, eine Messung, setzt lineare Proportionalität voraus
HPLC anwendung
analyse löslicher fester und flüssiger Substanzgemische
Gemische trennen
qualitative Analyse
quantitative
HPLC Aufbau
S
Detektor
erfasst moleküle am ende der säule aufgrund von phys/ chem Eigenschaften
bildert ein aus Molekülen bestehendes stoffliches Signal in ein elektrisches ab
UV-Vis Detektor, Transmissionsgrad, Opazität, dek Extinktion
misst LLichtabsorption des Eluates
190-950 nm
Transgrad: Verhältnis Intensität nach zu vor der Zelle
o: Kehrwert transmissionsgrad
dek E: neg dek log tg (Lambert Beersches Gesetz)
Durchführung
Ziel: Bestimmung Wirkstoffe und Gehalt
isokratisch: Eluiermittelgemisch bleibt gleich (m P: 70 % Wasser, 0,1% H3PO4 und 30% MeOH mit 0,1%H3PO4
Wellenlänge: 240 nm
Stammlösung: 70:30 Wasser / MeOH
Standards:
Durchflussmaarkierer: Lsg aus Thioharnstoff und Stammlsg
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