HPLC

Flüssigkeit welche die Säule verlässt, wird analysiert

mobile Phase

Trennung von Stoffgemischen

• Kernelement

• Rohr aus Edelstahl

• gepackt mit feinen Partikeln auf Basis von Kieselgel (stationäre Phase, können Säule nicht verlassen)

• Trennung durch WW Analyt mit stationäerer Phase

• DM 1,9-10 µm

• irregulär oder sphärisch

• voll porös, semi porös (pellikular) oder unporös

• Porengrößen: Makro, Meso oder Mikro

—> Retention und Selektivität gegeben durch unterschiedliche WW

• DIspersionskräfte: unpolare Gruppen

• Dipol-induzierter Dipol: polare Gruppen & Aromaten

• Dipol-Dipol: unterschiedl polare Gruppen

• Charge-Transfer: unterschiedl aromatische KWS

• H-Brücken: Dipol-Dipol zw Protonendonatoren und -akzeptoren

• Elektrostatisch: unterschiedl geladene funkt. Gruppen

• Analytenmol in mob Phase werden durch Fluss weitertransportiert

• an stat Phase: behalten Position

• WW bestimmen in welcher phase Mol befindet

• können durch Wahl von mob & stat Phase gesteuert werden

• Durchführung mit Proben bekannter Konzentration

• Einpunktkalibrierung: ein Standard, eine Messung, setzt lineare Proportionalität voraus

• analyse löslicher fester und flüssiger Substanzgemische

• Gemische trennen

• qualitative Analyse

• quantitative

S

• erfasst moleküle am ende der säule aufgrund von phys/ chem Eigenschaften

• bildert ein aus Molekülen bestehendes stoffliches Signal in ein elektrisches ab

• misst LLichtabsorption des Eluates

• 190-950 nm

• Transgrad: Verhältnis Intensität nach zu vor der Zelle

• o: Kehrwert transmissionsgrad

• dek E: neg dek log tg (Lambert Beersches Gesetz)

• Ziel: Bestimmung Wirkstoffe und Gehalt

• isokratisch: Eluiermittelgemisch bleibt gleich (m P: 70 % Wasser, 0,1% H3PO4 und 30% MeOH mit 0,1%H3PO4

• Wellenlänge: 240 nm

• Stammlösung: 70:30 Wasser / MeOH

• Standards:

• Durchflussmaarkierer: Lsg aus Thioharnstoff und Stammlsg