Buffl
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4. Semester

histo pr

LB
by Laura B.

H.E. Färbung

Farbstoff

Hämalaun: Kernfarbstoff, positiv geladen= basisch; Eosin: Zytoplasmafarbstoff, negativ geladen= sauer

H.E. Prinzip

Physiko-Chemische  Färbung

Hämatoxillin + Natriumjodat à oxidiert = Hämatein

HämateinàFarbbeize Aluminiumion (Metall)= Hämalaun/basischer Farbstoff

Eosin= Tetrabromfluoreszein Farbstoff àfärbt in leicht saurer Lösung +-geladenen Proteine (Zytoplasma)


H.E. Anwendungsbereiche


·        Übersichtsfärbung

·        Routine

·        Schnellschnitt

àwird bei jedem histologischen Präparat verwendet

H.E. Fehlerquellen

Hämalaun-spezifisch:

Haltbarkeit überschritten àÜberreife/Oxidation

Nicht gebläut


Eosin-spezifisch:

Eosin nicht angesäuert

Eosin bei Gebrauch nicht gemischt

Reagenzien vertauscht


H.E. Durchführung lang

Reagenz

Zeit

1. Xylol 1

2. Xylol 2

3. Xylol 3

4. Xylol 4

2 min

2 min

2 min

2 min

5. Alkohol 100%

6. Alkohol 100%

7. Alkohol 96%

8. Alkohol 96%

9. Alkohol 70%

2 min

2 min

2 min

2 min

2 min

10. Aqua dest.

2 min

11. Hämalaun

12. „Bläuen“ (Leitungswasser)

13. Eosin

10 min

10 min

Bis 2 min

14. spülen in A.D

 

15. Alk. 70%

16.Alk 96%

17.Alk 96%

18. Alk 100 %

19. Alk 100%

Alles 2 min

20. Xylol 1

21.Xylol 2

22. Xylol 3

23,Xylol 4

Alles 2 min

24: eindecken in Eukitt

 

Gesamtdauer

60 min


H. E. Färbeergebnis

Blau/Basophil

Zellkerne, Cytoplasma basophil, Bakterien, Kalk, Knorpel, Knochen, Schleim

Rot/eosinophil

Cytoplasma eosinophil, kollagenes Bindegewebe, Erys


H.E. kurz

Reagenz

Dauer (min)

(1.       Alk. 100%)

Kurz, wenn nicht vor fixiert

1.        Hämalaun nach Mayer

1

2.        „Bläuen“ in Leitungswasser

1

3.        Eosin

1

4.        Spülen A.D.

Kurz

5.        Alk. 70%

6.        Alk. 96%

7.        Alk 96%

8.        Alk 100%

9.        Alk 100%

10.      Xylol 1

11.      Xylol 2

12.      Xylol 3

13.      Xylol 4

Alles 4x eintauchen (Gesamtdauer 1 min)

14.      Eindecken in Eukitt

 


Van Gieson

Prinzip

·        Trichromfärbung ->Physiko-chemisch/physikalisches Prinzip

Durch Elektroadsorption und Dispersität

Van Gieson

Färbeergebnis

·        Zellkerne: schwarz

·        Cytoplasma, Muskulatur, Schleim, Kolloid: lehmgelb

BG kollagen : rot

Van Gieson

Anwendungsgebiet

·        Bindegewebsdarstellung

àCirrhosen, Fibrosen, Sklerosen

Van Gieson

Fehlerquellen

Speziell: ->pH-Wertschwankungen

  • Farbniederschläge durch A.D. vor Fe-Hämatoxillin

  • Nicht gebläut

  • Eisenhämatoxylin nicht mehr haltbar (Oxidation)

  • Nicht differenziert


Van gieson Durchführung

Entparaffinierung/Xylol

X4, je 2 min

Absteigende Alkoholreihe bis 70%

Je 4x tauchen

Eisenhämatoxylin nach Weigert

5 min

Spülen A.d.

 

Kurz differenzieren in HCl-Alkohol

3-4x kurz

Bläuen bei fließendem Leitungswasser

10 min

A.D.

Kurz

Van-Gieson-Gemisch

5-15 sek

Spülen in A.D.

kurz

Aufsteigende Alkoholreihe

Je 4x tauchen

Xylol

X4 je 2 min

Eindecken in Eukitt

Gesamtdauer: 60/35 min


PAS

Prinzip

Zweizeitige indirekte, chemische Färbung


Perjodsäure: Glycolgruppen der Kohlenhydrate werden in Aldehydgruppen umgewandelt


Schiffs Reagenz: Aldehydgruppen reagieren mit Shciffsreagenz zu einem roten Farbstoff (Fuchsin)

PAS

Färbeergebnis


·        Zellkerne: blau

·        Cytoplasma: gelblich

·        Basalmembran, schleimbildende Drüsen, Muskel


PAS

Anwendungsgebiet


·        Kollagenes BG

·        Basalmembran

Schleim

PAS Fehlerquellen

  • Haltbarkeit von  Perjodsäure und Schiffsreagenz überschritten(2-3 d haltbar)

  • Perjodsäure+ Schiffsreagenz nicht im Kühlschrank aufbewahrt/gekühlt

Speziell Hämalaun

  • Haltbarkeit überschritten

  • Nicht gebläut


PAS

Durchführung

Entparaffinierung/Xylol

X4, je 2 min

Absteigende Alkoholreihe bis 70%

Je 4x tauchen

A.D

 

Perjodsäure 1% wässrig

5 min

Fließend wässern

5min

Schiffsreagenz

5 min

Fließend wässern

5 min

Hämalaun (Sigma)

10 min

Fließend wässern

10 min

Aufsteigende Alkoholreihe

Je 4x tauchen

Xylol x 4

Je 2 min

Eindecken in Eukitt

 


Masson Goldner

Prinzip

Trichromfärbung ->Physiko-chemisch/physikalisches Prinzip

  • Eisenhämatoxilin nach Weigert: Regressiver Kernfarbstoff

  • Ponceau de Xylidine, Goldorange: Cytoplasmafarbstoff, feindispers

  • Lichtgrün: BG-Farbstoff, grobdispers


Masson Goldner

Färbeergebnis

  • Zellkerne: braunschwarz

  • Cytoplasma, Muskulatur: rot

  • BG kollagen : rot

  • Erythrozyten: orange


Masson Goldner

Anwendungsgebiet

·        Bindegewebsdarstellung

àCirrhosen, Fibrosen, Sklerosen

Masson Goldner

Fehlerquellen

Fe-Hämatoxylin

  • Farbniederschläge durch A.D. vor Fe-Hämatoxylin

  • Nicht gebläut

  • Eisenhämatoxilin nicht mehr haltbar (Oxidation)

  • Nicht differenziert

  • Falscher Kernfarbstoff


Alcianblau

Prinzip

Physikochemische Färbung für saure Mucopolysaccharide


Alcianblau:

  • Basischer Farbstoff, spezifisch für saure MPS, Verstärkung der Spezifität durch pH-Wert Veränderungen auf 2-3 pH

  • Wird nicht angesäuert, stellen sich sogar Zellkerne /kollagene Fasern dar, welche das Differenzieren erschweren

Kernechtrot:

Kernfarbstoff/Cytoplasmafarbstoff

Alcianblau

Färbeergebnis

·        Rot: Zellkerne

·        Farblos: Cytoplasma

·        Blau: saure MPS, Knorpelsubstanz, Granula der Mastzellen


Alcianblau

Anwendungsgebiet

Schleim in Lunge, Darm, Knorpel

Alcianblau

Fehlerquellen

  • Alcianblau nicht angesäuert

  • pH-Schwankung, Farbstofflösung falsch angesetzt

  • Zeiten nicht eingehalten

  • Falsche Reihenfolge


Papanicolaou

Prinzio

Polychromfärbung nach Papanicolaou, Standardfärbung Zytologie

  • PAP1: Kernfärbung mit Hämatoxylin

  • PAP2: Zytoplasmafärbung mit OG 6

  • PAP3: Polychrom-Lösung


Physikalisch-chemische Färbung

1. Hämatoxylin+ Na-Jodat >Oxidation zu Hämatein

· Hämatein mit Metallionen (Aluminium) > Hämalaun (basischer Farbstoff)

2. Hämalaun= Indikatorfarbstoff -> in saurer Lösung <3 an neg. geladene Gruppen (Chromatin, Histone, saures Glucoamin)

3. Bläuen ->alkalisches Milieu: bringt Blaufärbung

Gegenfärbung des Cytoplasmas , verschiedene Substanzen bringen je nach pH usw. unterschiedliche Farbqualitäten (eosinophil, cyanophil)

Papanicolaou

Strukturen

Strukturen

Farbe

  • Kerne


  • Zytoplasma

 





  • Nebenbefunde

  • Kernstruktur kontrastreich, dunkelblau (basophil)

  • ->Cyanophil: unreife Plattenepithelien,

    ->eosinophil: Superficialzellen

  • ->farblos: cervikales Zylinderepithel


    ->Erys: hellrot/rot, Bakterien: blau


Papanicolaou

Anwendungsgebiet

  • Standardfärbung weltweit in der Onkologie

  • In gynäkologischer Cytologie rasche  Orientierung über die Hormonwirkung zum Zeitpunkt der Abstrichnahme


Pappenheim

Prinzip

Panoptische Färbung, Kombination der MAY_GRÜNWALD-Färbung mit GIEMSA

MAY-Grünwald:

·        Farbstoffe Methylenblau + Eosin

·        Methylenblau + Eosin= Salz ->Methyleneosinat

Giemsa:

Azur A, Azur B, Methylenblau, Eosin

Pappenheim

Färbeergebnisse

Strukturen

Farbe

·        Zellkerne

·        Cytoplasma

·        Granula

·        Kerne Leukos

·        ZP Erys

·        ZP Lymphos

·        Granula neutrophil

·        Granula basophil

·        Granula eosinophil

·        Rötlich-violett bis blau

·        Rötlich-orange, grau-blau, hellblau

·        Violett-rot-orange

·        Blau bis rötlich-violett

·        Rosa

·        Hellblau

·        Hellviolett

·        Dunkel violett

·        Ziegelrot bis orange


Pappenheim

Anwendungsbereiche

  • Sehr wichtige Färbung in der Cytodiagnostik (Hämatologie, Blutausstrich)

  • Auch Standard in onkologische Cytologie


Giemsa

Prinzip

Physiko-chemische Färbung

  • Auch „Azur-Eosin-Methylenblaufärbung“ genannt

  • Saure Bestandteile der Zelle mit negativer, elektrischer Ladung (DNA, RNA) sind basophil ->blaue Färbung

  • Basische Bestandteile: azidophil ->Färben sich mit sauren Farbstoff rot

  • Neutrophile Bestandteile färben sich mit beiden Farbstoffen an

(Färbung durch pH-Wert der Lösung, Pufferlösung und Färbezeit beeinflusst)

Giemsa

Färbeergebnis

·        Tiefblau: Zellkerne, (Ztoplasmabestandteile

·        Blau: Bakterien

·        Hellrot: Granula (eosinophil-Erythrozyten, Bindegewebe

·        Purpur : Mastzellen, Granula, Schleim


Giemsa

Anwendungsgebiet

  • Lymphorgane

  • Entzündungen(allg.)

  • Bakterien


Giemsa

Fehlerquellen

Spezifisch

·        pH-Wert Änderung

·        Zeiten nicht eingehalten

Allg.

·        Farbe falsch gelöst

·        Reihenfolge vertauscht

·        Unsauber gearbeitet


Herz

Makroskopie

 (Myokard+Epicard sichtbar) Organ /Gewebeausschnitt

Organ

Herz

Morphologisches Bild

Endocard

·        Endothel

· BG (elastische Fasern, glatte Muskelzellen, Blutgefäße Purkinje Fasern)

Myocard

· Herz-Muskelzellen ( quergestreift verzweigt, verschiedene Richtungen)

· 1-2 mittige kerne, Glanzstreifen (TreppenförmigeZellverbindungen

·        Blutgefäße

·        Querstreifen,

·        BG

Epicard

·        Fettzellen

·        Nerven

·        Blutgefäße,

·        BG

·  einschichtiges Plattenepithel + Mesothel = Tunica Serosa


Zunge

Makroskopie

·        Organausschnitt

·        Schichtung erkennbar

·        Gewebestränge verlaufend in unterschiedliche Richtungen

Organ

Zunge

Morphologisches Bild

Tunica Mucosa

àL. epithelialis

 

 

· mehrschichtig unverhorntes Plattenepithel

·Papillen: Fungiform, Vallatae, Foliatae (+ Geschmacksknospen), Filiformis ( ohne Geschmacksknospen + verhorntes Plattenepithel)

->L. propria

·        BG

·        Gefäße

Drüsen:

·        serös (Ebnersche) Drüsen

·        Mucöse Speicheldrüsen

·        Gemsichte (Nihnsche) Drüsen

àL. muscularis mucosae

·        Einzelne glatte Muskelzellen

T. muscularis

·        Verschiedene Richtungen

·        Quergestreifte Skelettmuskulatur

·        BG

·        Gefäße

·        Nerven

Zungenunterseite

·        Ohne Papillen

·        Mehrshcichtig unverhorntes Plattenepithel


Ösophagus

Organ

Ösophagus

Morphologisches Bild

Tunica Mucosa

àL. epithelialis

1.        Mehrschichtig unverhorntes Plattenepithel

àL. propria

2.        BG

3.        Gefäße

àL. muscularis mucosae

4.        Glatte Muskelzellen /Lymphfollikel

Tela submucosa

1.  BG

2. Gefäße

3. Drüsen, mucös

4. Nerv (Plexus submucosus oder Meissner)

T. muscularis

1. 2 Schichten, innere Ring, äußere Längsmuskulatur

2. Quergestreift oberes 1/3 oder glatte Muskulatur untere 2/3

3. Nerv ( Auerbach oder P. myntericus), Gefäße, BG

T. adventitia

1. BG

2. Gefäße

3. Fett, Mesothel


Duodenum

Makroskopie

QS , halber QS, Gewebeausschnitt, Schichten erkennbar

Organ

Duodenum, Jejunum, Ileum

Morphologisches Bild

T. mucosa

è  L. epithelialis

  • einschichtig hochprismatisches Epithel+ Becherzellen

è  L. propria

  • Gefäße, BG

è  L. muscularis

  • Lymphfollikel (Peyer’sche Plaques ->Ileum)

Zotten

·        Blattförmig ->Duodenum

·        Fingerförmig -> Jejunum

·        Plump ->Ileum (fast keine)

·        Glatte einzelne Muskelzellen

Krypten

·        Von Duodenum zunehmend bis Ileum

Tela submucosa

  • BG

  • Gefäße

  • Drüsen

  • Brunner’sche Drüsen (Duodenum)

T. muscualris

  • Ring-/Längsmuskulatur

  • Glatt

  • BG

  • Gefäße, Nerven

T. serosa

·        BG

·        Gefäße

·        Fett

·        Mesothel


Leber

Makroskopie

 Gewebeausschnitt

Organ

Leber

Morphologisches Bild

Stroma Kapsel

·        BG

·        Gefäße

·        Septen

Parenchym

·        Läppchenbildung

·        Radiäre Zellanordnung der Hepatozyten Richtung Zentralvene

·        Fett

·        Begrenzt mit bindegewebigen Periportalfeldern mit Gefäßen und Gallengang

->vena lobularis (großlumig)

-> Arteria interlobularis

( kleinlumig)

->Duchtus interlobularis

( kubisches Epithel, große, runde Kerne)


Lunge

Makroskopie

Gewebeausschnitt, grobmaschige Netzstruktur

Organ

Lunge

Morphologisches Bild

Stroma/Kapsel

·        BG

·        Elastische Fasern

·        Gefäße

·        Mesothel (äußere Haut)

Parenchym

·        Alveolen

·        Kapillaren

·        Gefäße

·        Plattenepithel

·        Pneumocyt I

·        BG

Bronchien

·        Sternförmiges Lumen

·        Knorpelplatten (Ø bei Bronchioli)

·        Muskel glatt

·        BG

·        Gefäße

·        Flimmerepithel (evtl. Bronchioli flacheres Epithel)


Colon

Keine Zotten , nur noch Krypten; sehr dicht beieinander, im Epithel vermehrt Becherzellen ->helles Bild

  • Plicae semilunares: im mikroskopischen Präparat nicht sichtbar->Muskel erschlafft nach entnahme

Makroskopie

·        Evtl. QS/ halber QS

·        Mit Lumen

Organ

Colon

Morphologisches Bild

Tunica Mucosa

->L. epithelialis

  1. hochprimatisches Epithel+ viele Becherzellen

->L. propria

  1. BG

  2. Gefäße

  3. Lymphfollikel

->L. muscularis mucosae

  1. keine Zotten mehr, nur noch Krypten

Tela submucosa

1.  BG

2. Gefäße

3. Drüsen, mucös

4. Nerv (Plexus submucosus oder Meissner)

T. muscularis

  • inneren Ring- und einer äußeren Längsmuskelschicht, aus glatter Muskulatur

  • äußere Schicht sehr dünn, an 3 Stellen bündelförmig verdickt (Tänien)

  • Tänien raffen Darmwand -> innen Plicae semilunares, außen Haustren

T. adventitia

1. BG

2. Gefäße

3. Fett, Mesothel




Masson Goldner



PAS




Van Gieson



Alcianblau



Giemsa



H.E.



Papanicolaou



Pappenheim

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Laura B.

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