Klausur

DNA; Hitzestabile DNA-Polymerase; Nukleotide; 2 verschiedene Primer; Puffer

Denaturierung (ca. 95°) Annealing (ca. 50-60°) DNA-Polymerisation (72°)

Vorteile: schnell & einfach; empfindlich (minimale Mengen); robust

Nachteile: kleine DNA Fragmente werden bevorzugt vermehrt; Quantifizierung (Menge an Material bei einer PCR ist begrenzt);

komplementäre Basensequenzen zu Primern ist Muss

Quantitative Polymerasen Kettenreaktion

Es erfolt eine Messung der DNA Konzentration über Floureszens bei jedem Zyklus.

zB mit Sybr Green, FRET-Sonden

Reverse Transkriptase Polymerase Kettenreaktion

Dient dem Nachweis von RNA. Mittels der reversen Transkriptase muss zunächst ein DNA Strang erzeugt werden, da DNA Polymerasen keine RNA vervielfältigen können.

Verschachtelte PCR

Es finden zwei PCR Reaktionen hintereinander statt, wobei das erste Produkt als Vorlage für die zweite Reaktion mit anderen Primern dient.

Dient zur erhöhung der Spezifität einer PCR Reaktion.

Sie vermeidet eine unspezifische Bindung der Primer und verhindert somit die Bildung von “falschen“ PCR Produkten.

short tandem repeats (=Mikrosatelliten 6bp, Minisateliten 15bp, klassische Satelliten DNA 5-300bp)

Forensik, Vaterschaftstests, Lebensmitteltests, Populationsgenetik, Infektionsbiologie

Veranlassen ihren Wirt, die Plasmid-DNA durch direkten Zell-zu-Zell-Kontakt auf eine Empfängerzelle zu übertragen.

Gerichteter Transfer von Plasmid-DNA aus einer Spender- in eine Empfänger-Bakterienzelle durch Zellkontakt.

Konjugation ist genetisch determiniert.

ß-Galactosidase spaltet X-Gal

Ampicillin hindert Bakterien ohne aufgenommenen Plasmid zu wachsen.

• Wenn das Gen inaktiviert ist oder nicht exprimiert wird, bleiben die Bakterien weiß, da sie nicht genügend β-Galaktosidase produzieren können, um das X-Gal zu spalten.

• Wenn das Gen aktiv ist und exprimiert wird, produzieren die Bakterien β-Galaktosidase, und wenn sie mit X-Gal in Kontakt kommen, spalten sie es in ein Produkt, das eine blaue Färbung ergibt.

• Bakterien ohne Plasmid können auf dem Medium nicht wachsen.

Der Wirkstoff hemmt selektiv die bakterielle Zellwandsynthese (Querwandverbindungen werden unterbrochen) und wirkt so bakterizid.

Membran platzt durch Osmotischendruck.

Bestimmung der Nukleotid-Abfolge in einem DNA-Molekül.

Zoon (Lebewesen) & nosos (Krankheit)

Es beschreibt Infektionskrankheiten, die auf natürliche Weise vom Menschen auf ein Tier (Anthropozoonose), vom Tier auf den Menschen (Zooanthroponose) oder in beide Richtungen (Amphixenosen).

Lebendimpfstoff,

Totimpfstoff

Vektorimpfstoff

mRNA-Impfstoff

Restriktionsenzyme, genauer auch Restriktionsendonukleasen, sind Enzyme, die DNA an bestimmten Positionen erkennen und schneiden können.

Dienen zur Abwehr von Fremd-DNA, zB Bakteriophagen.

Ort der Spaltung zufällig, >1000 bp von Erkennungssequenz

Pentamere Enzymkomplexe

Spaltung erfolgt 25-30 bp downstream der Erkennungsstelle

Erkennungssequenz assymetrisch

wirkt als Monomer

Spaltung erfolgt in der Erkennungssequenz

Zwei Seperate Ebzyme arbeiten unabhängig von einander

Nonsensemutation = verkütztes Genprodukt

Punktmutation = an einer Stelle

Rasterschubmutation = durch Verlust oder Zusatz von Base.

Deletion = Verlust von Basen

Insertion = zusätzliche Basen

Translokation = Verlagerung einer Basensequenz an einen anderen Ort

Wobblemutation = 3 Stelle von Codon, meistens keine Auswirkung

Ribosom 80s: Untereinheit 60s & 40s

Ribosom 70s: 50s & 30s

Die 16S ribosomale RNA (rRNA)

Komponente der ribosomalen Untereinheit in Bakterien

Diese RNA-Sequenz ist bei Bakterien konserviert & weist Unterschiede auf, die es ermöglichen, zwischen verschiedenen bakteriellen Spezies zu unterscheiden

Sequenzierung der 16S rRNA ermöglicht es phylogenetische Beziehungen zwischen verschiedenen Bakterienarten zu untersuchen

Stammbaumanalyse

Mit feiner Nadel werden DNA oderPartikel direkt in Zelle eingeführt.

Die Zellen-DNA-Mischung wird dann zwischen zwei Elektroden platziert, die einen elektrischen Impuls erzeugen können.

Der elektrische Impuls führt dazu, dass die Zellmembranen vorübergehend durchlässig werden, was es der DNA ermöglicht, in die Zellen einzudringen. Dieser Prozess wird oft als "Puls" bezeichnet.