Polymerase Chain Reaction

Amplifikation

taq-Polymerase (hitzestabil)

Thermocycler

Mg^2+

DNA Sequenz

DNA- Primer

Puffer Lösung

Desoxynucleosid-Triphosphate

Primer passen auf eine ganz bestimmte Sequenz (Komplementär)

20-30 Wiederholung

Etwa 94 °C

Durch Hitze trennen sich Wasserstoffbrücken des Doppelstrang. Es entstehen zwei Einzelstränge

Ist auf etwa 60 °C abgekühlt.

Zwei DNA Primer binden Komplementär an beide DNA Einzelstränge

Niedrige Temperatur notwendig, damit Primer ansetzen können und sich Wasserstoffbindungen bilden können

(Wird erhitzt auf etwa 72 °C)

Taq-Polymerase setzt ein Primer und synthetisiert jeweils den neuen Strang von 3’ zu 5’ Ende

(Wie beim Leitstrang der Replikation)

Mit erhitzen trennt sich Taq Polymerase, außerdem spaltet sich DNA Doppelstrang wieder

Zu lange komplementäre, stränge synthetisiert, weil bei 5’ zu 3’ Kein Stopsignal vorhanden ist

Diese besitzen die Länge des zu vervielfältigen DNA Abschnitts

Ist abhängig von Länge des Primers und Anzahl der C- und G-Basenbindungen

Tm= 2 °C • (A + T) +4 °C • (G + C)

1. Dürfen nicht Komplementär zueinander sein (binden sonst aneinander)

2. Müssen beide eine ähnliche Hybridisierungs Temperatur haben (sollen gleichzeitig an DNA Sequenz binden, Um Fehl Paarung zu verhindern)

3. Primer Sequenz darf nicht komplementär zu sich selbst sein. (sonst faltet sich Primer in sich selbst zusammen.).

Desoxyribonukleotid-tri-phosphate

Sie sind die Bausteine, aus denen neuer DNA während der Polymerasekettenreaktion (PCR) synthetisiert wird. Diese Nukleotide enthalten die vier Basen Adenin (A), Thymin (T), Cytosin (C) und Guanin (G), die jeweils an einen Desoxyribose-Zucker und drei Phosphatgruppen gebunden sind

Bei der Polymerisation werden die äußeren beiden Phosphatgruppen (als Pyrophosphat) abgespalten.