Vorlesung 12

• Zytologisce Untersuchunger mittels DFZ statt Zählkammer und Mikroskop

• sehr genaue Bestimmung der Blutzusammensetzung

• mittels fluoresz. AK auch Auswertung weiterer Eigenschaften der Blutzellen

  • Zellteilungszeit

  • Expression von Tumormarkern

• Mittels Flüssigkeitsstrom gelangt Zellprobe durch die kapillare in das Zytometer

• Wiederstandsänderung beim Durchtritt des einzelnen Partikels durch die Kaoillaröffnung

  • wiederstandsänderung proportional zur Größe und zum Partikelvolumen

  • Elektr. registrierung von Zahl und Höhe dieser Impulse

    • damit Blutgruppenzuordnung möglich

• man kann Partikel zwischen 0,4 und 50 um analysieren

  • z.B. Blutzellen, Chromosomen, Algen & Protozoen

= Messung für Partikel, wie zellen, Bakterien oder makierte Beads

• die Partikel passieren in einem Flüssigkeitsstrom einem Laser

• Zellen werden differenziert

• je größer die Zelle, desto mehr Strukturen in ihrem Inneren, desto mehr Streulicht entsteht

  • streulicht entsteht wenn der Laser auf eine Zelle trifft

• Vorwärtsstreulicht

  • in Richtung des ursprünglichen Strahls

  • hängt vor allem von der größe der Zelle ab

• Seitwärtsstreulicht

  • im 90° Winkel zum ursprünglichen Strahl

  • hängt vor allem sehr stark vom Inhalt der Zelle ab (auch Größe)

• erfolgt nach demPrinzip der DFZ über eine hydrodynamische Fokkusierung

• kann parallel zur Messung von Erys, Hb und Thrombos erfolgen

  • mittels Streulicht, Impedanz (Wechselstromwiederstand)

  • alternativ über Konduktivität

• Differenzierung der leukos in Neutrophilie, Eosinophilie, Basophilie, Monozyten (rosa) und Lymphozyten

  • Zellderbis (lila) und Beads sind auch differenzierbar

• FSC & SSC kann Zellpopulation unterscheiden

• weitere Unterscheidung über CD-AG

  • Immunphänotypisierung = Bindung von Flureszenzmarkierten monokl.. AK an spez. CD-AG

• CD-Cluster of Differentation

  • CD 8 T-Lymphos, cytotox. T-Zellen

  • CD 4 T-helferzellen

• Präparation der Probe (gewaschen/ungewaschen)

• Fluorochrome

• Gating

• Absolutzahl

• Zytometer

• Regularien,wie Akkreditierung, Zertifizierung

+besseres Signal-Rausch-Verhältnis

+ Populationen sind besser darstellbar

+geeignet für qualitative Untersuchungen

-unspezifischer Zellverlust

+kein zellverlust

+geeignetfür quantitative Untersuchung

+optimal für Absolutzahlbestimmung

+am besten in Kombi mit pH stabiler Lyse

• Autoflureszens

  • Laser regen nicht nur Fluorochrome an, sondern auch Substanzen in der Zelle, wie NADPH, Lipide, …

  • je komplexer die zelle, desto größerdie Eigenfluoreszens

• Interne Negativkontrolle

  • negative Population im selben Röhrchen

  • identische Bahandlung von Negativpopulation und Zielzellen

  • kombiniert Autoflourezens und unspezifische Bindung

• Isotypkontrolle

  • die Isotypen müssen an das selbe Fluorochrom gebunden sein, aber ein anderes Epitop

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