Kopien herstellen bei Prokaryoten (einfach Organismen ohne Zellkern => Balterien)
Bei Prokaryoten kann die PCR genutzt werden um gezielt Kopien des Gens herzustellen.
Kopien herstellen von Eukaryoten(komplexe Organismen mit Zellkern => Pflsnzen- o. Tierzellen)
Zuerst wird die mRNA isoliert, welche die genetischen Informationen enthält für die Protein Synthese. Um die mRNA nützlich zu machen muss sie zunächst vom Enzym -der Reverse Transkiptase- in cDNA (komplementäre DNA, diese enthält keine Intros) umgeschrieben werden. Die cDNA wird dann vervielfältigt.
mRNA => (der Reverse Transkiptase) cRNA (enthält nur Exons)
Was passiert mit der Isolierten Information
Die Isolierte Information in Form eines isolierten Gen(bei Prokaryoten) und cDNA(bei Eularyoten) werden dann in einen Vektor(welcher häufig aus Plastiden besteht => ringförmige DNA-Molekühle) verpackt
Das schneiden der DNA
Das schneiden der DNA erfolgt mit dem Restriktionsenzym, welches die DNA und das Gen so schneidet, dass Sticky Ends entstehen. Dadurch wird es uns ermöglicht wenn die Sticky End zueinander passen, die Gen- o. DNA abschnitte dann in ein Plasmid eingefügt werden können. In Plasmide wird das Gen eingefügt, damit wir die Gene in Bakterien nutzen können.
DNA übertragen
Der geöffnete Vektor und die gewünschte DNA werden jetzt zusammengebracht. Die Sticky-Ends passen jetzt aufeinander und werden von der DNA-Ligase miteinander verbunden. Das neugebildete DNA-Molekühl, heißt Plasmid.
Die Zellwände der Bakterien müssen so besarbeitet werden, dass diese durchlässig sind, damit die Plasmide in die Bakterien eingefügt werden können.
Nicht jedes Bakterium lässt sich barbeiten.
Bakterien selektieren
Es werden Markergene zum Plasmid hinzugefügt, damit die DNAwände sich trotzdem öffnen. Der Vektoren dienen als Transportmittel für die Plasmide um neue DNA-Zellen zu erreichen.
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