Anna Zusatz (Chromo)

• für Anthrechinone 2

-> Gibbs-Reagenz: Gelbbraun bis orange Färbung

-> Bornträger Reaktion (KOH): Rotfärbung, Fluoreszenz (365nm)

-> Echtblausalz: rötlcih, violett, oragne Färbung

-> Naturstoffreagenz-PEG: Fluoreszenz (365nm)

-> Jod-HCl Reagenz: orangebraune Färbung

• 2 Möglichkeiten!

-> Dragendorff-Reagenz: orangebraune Färbung

-> Ehrlich-Reagenz mit roter Färbung

-> SbCl3: blaue Färbung, Fluoreszenz (365 nm)

Adsorption

• Stoffe werden nach Polarität getrennt

- bei Substanzen mit sauren oder basischen Eigenschaften kann es zum "tailing" kommen

Lösung: - Modifire!!! 1-2%- sorgen dafür, dass die Substanz undissoziiert bleibt.

• in der Normal- und Umkehrphase DC werden Moleküle nach ihrer Polarität aufgetrennt

• in der NP-Chromatographie eluieren apolare Moleküle als erstes

• Reihenfolge, geordnet nach Polarität

• -> Aromaten haben somit die geringste Elutionskraft bezogen auf einen polaren Stoff.

• -> und Carbonsäuren können polare Stoff am weitesten über die Platte ziehen.

Vergleich der Probe mit: - Referenzextrakt- Referenzsubstanzen- 2 verschiedene Fließmittelgemische

Chromatographische Trennmethoden sind mehrstufige Trennmethoden, bei denen die Bestandteile einer Probe zwischen 2 Phasen verteilt werden, wobei die eine stationär und die andere mobil ist.

-> um eine Beeinflussung der Ergebnisse zu verhindern, führt man die Trennung in einer mit dem Fließmittel gesättigten Atmosphäre in einem geschlossenen Gefäß durch.

Vorteile:

• verhindert das Verdampfen flüchtiger Fließmittelkomponenten => Veränderung der Zusammensetzung

• Bessere Reproduzierbarkeit der Ergebnisse

• bessere Trennung

-> V 8 (Flavonoidhaltige-Drogen): Vergleich der DC-Analyse bei gesättigter und bei ungesättigter Kammer

• durch chemische Nachweisreaktionen werden farblose Verbindungen durch unterschiedliche Reaktionen entweder in farbige Substanzen oder in fluoreszierende Produkte umgewandelt.

• Derivatisierungsmethoden:

  -> Universalreagenzien (z.B. starke Säuren - Oxidation/Verkohlung)

  -> Gruppenselektive Reagenzien (z.B. Ninhydrin - AS/einige Amine)

  -> molekülselektive Reagenzien (z.B. Enzyme)

-> Zusätzlichs Erhitzen beschleunigt Farbbildung (sofort markieren und dokumentieren) 

-> Schwefelsäure Tyhmol: rote Färbung

-> Dinitrobenzoesäure: blau-violette Färbung

2 Methoden:

-> Methanol Schwefelsäure: mit verschiedenen Färbungen

-> Vanillin H2SO4: färbt ebenfalls verschieden

2 Schritte:

• alkalische Hydrolyse des Fettes -> Fett muss als erstes Hydrolysiert (=gespalten) werden zu Glycerol und 3 Fettsäuren.

• Fettsäuren sind als solche nicht flüchtig. Daher müssen diese  derivatisiert oder gleich umgeestert werden.

  
  

  -> gerne Umesterung zu FS-methylestern

  -> Kapillarsäulen z.B. DB-23- Fettsäuremethylester als Kalibriersubstanzen

  -> Eignungsprüfung

• FID (Flammenionisationsdetektor)

• MS (Massenspektrometer)

• ECD (Elektroneneinfangdetektor)

• NPD (Stickstoff-Phosphor-Detektor)

• Identitäts- und Reinheitsprüfung für ätherische Öle => chromatographisches Profil

• Bestimmung von Fettsäuren in fetten Ölen => Fettsäure-Zusammensetzung

• Bestimmung von Sterolen in fetten Ölen

• Lösungsmittelrückstände

1= Carvacrol

2= Thymol

3= p-Cymen

-> Thymus vulgaris (echter Thymian): Thymi herba

• Kieselgel mit Cyclodextrinen modifiziert

• Trennung von Enantiomeren, Kontrolle der optischen Reinheit

• Wasserstoffbrückenbindungen und Dipol-WW

  -> Trennung von z.B. Steroiden

„Die Flüssigchromatographie (LC, liquid chromatography) ist einechromatographische Trennmethode, die auf Unterschieden in der Verteilung vonSubstanzen zwischen zwei nicht mischbaren Phasen beruht, wobei die flüssigemobile Phase die in einer Säule befindliche stationäre Phase durchfließt.Die LC beruht hauptsächlich auf den Mechanismen der Adsorption, derMassenverteilung, des Ionenaustauschs, des Molekülgrößenausschlusses oder aufstereochemischen Wechselwirkungen.“

• UV/ Vis bzw DAD

• RI (Brechungsindex)

• MS (Massenselektiver)

-> Auswahl richtet sich nach Eigesnchaften des Analyten

• extrem hohe Empfindlichkeit

• Massenspektren liefern zusätzliche Strukturinformation 

• hoher apparativer Aufwand zur Kopplung der Geräte

• in Pharmazie und Naturstoffchemie häufig direkte Kopplung mit DAD und electrospray-ionisierung (LC-DAD-ESI-MS)

  
  

• Nachteil: Teuer

UV/Vis:

• erste Wahl bei biogenen Arzneistoffen sofern Chromophor vorhanden

• Robust, zuverlässig, wartungsarm, hohe Empfindlichkeit

• vielseitig einsetzbar

DAD (Weiterentwicklung) = Dioden array Detector:

• Mehrkanalphotometet -> Messung mehrerer Wellenlängen gleichzeitig

• gesamtes Absorptionsspektrum des Analyten messbar

• schnelle Aussage über Identität und Reinheit

• z.T. kann auf Referenzsubstanzen verzichtet werden: -> Identifizierung mit Spektrenbibliothek 

Auswertung als 3D-Plot

= Refractive index = Brechungsindexdetektor

• Substanzen ohne Chromophor (Zucker, Polyethylenglycole, Polymere)

• universell einsetzbar: nahezu jede gelöste Substanz verändert Brechungsindex

• nur isokratische Trennung möglich

• niedrige Empfindlichkeit

• Kieselgel mit Octadecylresten modifiziert (Octadecyl-Silica, ODS)

• Anwendung bei eher unpolaren Substanzen 

• van-der-Waals-Kräfte

• - Trennung von organischen Molekülen z.B. Naturstoffen, Analgetika, Phytopharmaka

Sphinx-Säule:

• Kieselgel mit C18- und Phenylpropyl-Resten modifiziert

• Trennung von Stoffen mit aromatischen Ringen- Pi-Pi-u. hydrophobe WW-Trennung von z.B. Sulfonamiden und Xanthinen

Cyano-Säulen:

• Kieselgel mit Cyanogruppen modifiziert

• Mischung aus NP- und RP-Säule

• polare u. hydrophobe WW

• Trennung von z.B. Steroide u. tricyclischen Antidepressiva

= Ultra-Performance- Flüssigchromatographie

• arbeitet  mit wesentlich mehr Druck als HPLC

• hat kleineren Partikeldurchmesser als HPLC

• kürzere Laufzeit als HPLC

• massic höhere Trennstufenanzahl als HPLC

zuverlässige Detektion des Analyten erst oberhalb des Cutoffs möglich.

Die Polarität der stationären Phase -> Normalphase polarer als Umkehrphase

1. Der pH-Wert des Elutionsmittels -> Silica-basierte Säulen i.A. im pH-Bereich 2-8 stabil

2. Der Typ des Detektors, der verwendet wird -> Abhängig vom Analyten

3. Die Polarität der stationären Phase -> Normalphase polarer als Umkehrphase

4. Die Art der Probenvorbereitung

1. Fluoreszenzdetektor -> unüblich, Fluorophor nötig

2. Elektrokardiograph

3. UV-Vis-Detektor -> Substanzen mit Chromophor, Diode Array Detector (DAD) als Weiterentwicklung

4. Massenspektrometer -> Zusätzliche Information, teuer

Säule

1. Aceton

2. Hexan

3. Methanol

4. Dichlormethan

-> Cyclodextrine

• zur Trennung von Enantiomeren, z.B. für Steroide

  -> WW über H-Brücken-Bindungen und Dipol-WW

1. der D. misst die Größe der Moleküle ind er Probe. -> MS-Detektor erfassen das Masse/Ladung-Verhältnis

2. Der D. stellt die Temperatur der Säule ein. -> Ofen

3. Der D. erfasst die aus der Säule eluierten Verbindungen.

4. Der Detektor reguliert den Fluss des mobilen Phasenstroms. -> Pumpe

1. um systematische Fehler bei der Probenaufbereitung zu korrigieren

• Bilobalid

-> Sesquiterpenlacton, ist ein Isoprenoid

• Ginkgolide

  -> Diterpenlacton, gehört zu den Isoprenoiden

Ginkgolsäure:

• Achtung! Neurotoxisch

• Störstoff im Extrakt (max. <5ppm)

• Arzneizubereitungen müssen abgereichert werden!

  • max. 1,2 µg/Tag- Teemischungen im Lebensmittelbereich übersteigen die max. Tagesdosis um das 50- 100-fache

Ginkgotoxin:

= B6-Antivitamin

• in Samen (kaum in Blättern)

• Verzehr von nicht- erhitzen Samen kann zu Bewusstlosigkeit und Lähmungen führen

Wirkung:

-> B6-Antivitamin (ähnelt Vit. B6)

• hemmt Stoffwechselwege die Vit. B6 abhängig sind

• Hemmung der GABA-Produktion

• Hemmung der Glutamatdecarboxylase Aktivität

=> 2 der wichtigsten Neurotransmitter

= Protoaescigenin

Droge:

• Rosskastaniensamenextrakt

• = Hippocastani semini extractum siccum normatum

2

1. Der pH-Wert der mobilen Phase-> Nur bei basischen oder sauren Analyten

2. Die Temperatur des Detektors-> Kein Einfluss

3. Die Länge der Säule und die Partikelgröße der stationären Phase

4. Die Art der Probenvorbereitung-> Beeinflusst Zusammensetzung der Probe