1. Anfertigung einer Verdünnungsreihe mit RIngerlösung

2. KBE —> PC-Agar

   Hefen- und Schimmelpilze —> YGC-Agar

3. E. coli & coliforme Keime —> MPN Verfahren

   (1ml Probe / Verdünnungsstufe)

   —> Trübes Röhrchen = MO

   —> Gasbildung = coliforme Keime

   —> Bei Fluoreszenz = E. coli

   —> roter Ring durch Zugabe von Kovacs-Reagenz = E. coli

4. Staphylokokkennachweis durch Plattengussverfahren

5. Salmonellen:

   —> Rohmilch mit Peptonwasser vermengen & inkubieren

   —> Selektive Anreicherung:

   • unselektive Voranreicherung + RV-Boullion

   • unselektive Voranreicherung ´MKTTn-Boullion

   —> Nach Inkubation Verdünnungsaufstrich auf Agar

   —> Kolonienwachstum = mit polyvalenten Serum agglutinieren

   —> Positive Reaktion = Salmonellen

6. Listerien:

   —> Rohmilch mit Fraser-Boullion —> inkubieren

   —> Halbselektive Anreicherung in Fraser-Boullion übertragen

   —> inkubieren

   —> Auf Agar ausspateln —> inkubieren

   —> Auf Katalase testen, um von Enterokokken abzugrenzen

—> Wird mit Ringer-Lösung im Bag-Mixer homogenisiert

Serotypisierung:

• Omnivalentes-Serum für Abgrenzung von E. coli

  (Aggulation (Verklumpung) deutet auf E. coli hin)

• Gruppenspezifische Seren um Platten den einzelnen Salmonellen-Stämmen zuzuordnen

Membranfiltrationsverfahren:

• Auf E. coli untersucht (Agar: CC-Agar)

• Auf Ampicillin resistente E. coli (CC-Agar)

• Ciprofloxacin-resistente E. coli (CCA)

• Enterokokken (M-enterokokken Agar)

• GKZ (R2A-Agar)

In den Nährmedien war:

• 1x ohne AB

• 1x mit Ampicillin

• 1x Ciprofloxacin

• 1x beides

—> Plättchentest

—> Empfindlichkeitstest eines vom Patienten isolierten Stammes gegenüber mehreren Antibiotika

• Von den auf den Müller-Hinton-Platten gewachsenen Kolonien wird mit einer Öse etwas Material abgenommen

• und in 3 ml Müller-Hinton-Bouillon bis McFarland-Standard 0,5 suspendiert(0,10 ≤ OD600 ≤ 0,20). Die Suspension wird mit dem Vortex sehr gut homogenisiert.

• Danach werden die Müller-Hinton-Platten beimpft, indem 100 µl der Keimsuspension ausgespatelt werden.

• Auf die Platten werden innerhalb von 10-15 min mit dem Dispenser die sechs Testplättchen aufgebracht (Abbildungen 1 und 2).

• Die Platten werden 24 h bei 37 °C bebrütet

Auswertung:

—> durch Messung der Hemmhofdurchmesser um jedes Plättchen. Durch Vergleich mit den tabellierten Werten kann die Empfindlichkeit eines Keims beurteilt werden.

—> Die MIC wird durch direktes Ablesen von dem benutzten E-Test durchgeführt. Hierfür wird der Wert des Streifens abgelesen, an welchem das Bakterienwachstum den Streifen schneidet.

—> Anhand der so ermittelten MIC kann wiederum eine Aussage über die Empfindlichkeit des Keims getroffen werden.

• DNA extrahieren aus zwei unbekannten E. coli Kulturen (I und II), mithilfe eines Zymo Research DNA-Extraktions-Kits.

• eine PCR zum Nachweis des ß-Lactamasegens blaCTX-M1 durch

• Die PCR Ergebnisse werden mittels Agarose-Gelelektrophorese ausgewertet und die zwei unbekannten E. coli Kulturen (I und II) jeweils den E. coli Stämmen B und C von dem Versuchstag 5 (AB-Plättchentest) zugeordnet.

Auswertung: Anfärbung —> über Banden-Muster