Brandstätter

Licht ist zugleich Welle und Teilchen und hat deshalb eine Wellenlänge und eine Frequenz.

PSF = Punktausdehnungsfunktion: Sie gibt an, wie ein idealisiertes punktförmiges Objekt durch ein System abgebildet würde. Bei Mikroskopen begrenzt die PSF die erreichbare Auflösung

□ Die größte Auflösung in xy-Richtung hat das STED-Mikroskop. (r)

□ Energiereiches kurzwelliges Licht dringt tiefer ins Gewebe ein als energiearmes langwelliges Licht. (f)

□ Der dichroische Spiegel reflektiert nur die Fluoreszenz und nicht das Anregungslicht. (f)

□ Biolumineszenz ist eine Form der Fluoreszenz. (f)

□ Konfokales Laser-Scanning-Mikroskop 3

□ Stimulated Emission Depletion (STED) Mikroskop 4

□ Zweiphotonen-Mikroskop 2

□ Epifluoreszenz-Mikroskop 1

Bei der Fluoreszenzmikroskopie dient der Anregungsfilter…

➢ … der Filterung der gewünschten Anregungswellenlänge aus dem Anregungslicht und um unerwünschte Wellenlängen zu eliminieren.

- Filter müssen eingesetzt werden, um die geeignete Anregungswellenlänge aus dem Anregungslicht zu filtern und um die emittierte Fluoreszenz vom Anregungslicht optisch zu trennen.

➢ Geringe Streuung und Absorption

➢ Schont das Gewebe -> langwelliges Licht

➢ Weniger Bleicheffekte, da die Fluoreszenzmoleküle nur in der Fokusebenen angeregt werden

➢ Epifluoreszenz-Mikroskop

➢ Konfokales Laser-Scanning-Mikroskop

➢ (a) Stimulated Emission Depletion (STED) Mikroskop

➢ (b) Zweiphotonen Laser Scanning Mikroskop

➢ Total Internal Reflection Flourescence (TIRF) Mikroskop

a) Direkte Methode (direkter Nachweis der Antikörper-Antigen-Bindung)

• X

b) Indirekte Methode (indirekter Nachweis der Antikörper-Antigen-Bindung)

• b) höhere Sensitivität, da die Signalstärke gesteigert ist: eine Vielzahl an sek. AKs kann an den prim. AK binden (auch bei geringer Antigen Konz.)

➢ Kann praktisch mit jedem Protein fusioniert werden

➢ Ermöglicht die Beobachtungen von Zellvorgängen in lebenden Zellen

1) Elektronen eines Fluorophors werden durch das Auftreten eines Photons in einen angeregten Zustand S1‘ versetzt.

2) Dieser Zustand existiert für 1-10 nsec. Energie geht durch Unteraktionen und Zustandsänderungen verloren und führt zum Zustand S1 zurück.

3) Beim Zurückspringen des Fluorophors auf den Grundzustand S0 werden Photonen emittiert. Durch den Energieverlust beim Übergang von S1‘ auf S1 ist die Energie dieser Photonen jedoch geringer -> Wellenlänge des emittierten Lichts somit größer