ISH- Der passende RNA A* Strang kann mit Strang A unter bestimmten Bedingungen hybridisieren.
Bei der In situ Hybridisierung wird die DNA A nachgewiesen.
ISH - Die gebundene RNA kann farblich markiert werden, um die Aktivität des Gens zu visualisieren.
Die In situ Hybridisierung ermöglicht die örtliche Verfolgung der Genaktivität.
Bei der In situ Hybridisierung werden Proteine nachgewiesen.
Einfache Missexpressiontechniken sind transient und bilden perfekte Stränge.
In einfache Missexpressiontechniken kann DNA oder mRNA in Embryos eingebracht werden.
Einfache Missexpressiontechniken sind vor allem im Einzellstadium der Embryonen wirksam.
Bei den einfachen Missexpressiontechniken ist die DNA langfristig stabil im Gewebe vorhanden.
Aufwändige Missexpressiontechniken führen zu stabilen Integrationen der Fremd-DNA ins Genom.
Bei Xenopus und Fischen können über 100 Injektionen pro Tag durchgeführt werden.
Die Injektion in Xenopus-Eier im Einzellstadium ist einfach durchzuführen.
Die Verteilung der injizierten Substanzen in den Zellen ist immer gleich
Mikroinjektion ist ein aufwendiges Verfahren, insbesondere bei Fischen
Bei der Injektion in Fischembryonen liegt nur eine Zelle auf der Dotterkugel
Für die Mikroinjektion benötige ich viele Eier, bei denen der Zugriff gut ist.
Bei Frosch und Fisch kann ich parallel viele Eier injizieren
Bei der transienten Missexpression sieht man eine gleichmäßige Expression von GFP in allen Zellen.
Bei transgenen Linien kommt es zu einer Integration der Fremd-DNA ins Genom
Transgene Linien zeigen perfekt reproduzierbare Ergebnisse nach nur einer Generation
Transgene Linien werden durch die Übertragung des Transgens von einer Generation auf die nächste vererbt
Die Integration des Transgens in das Genom erfolgt immer an einem vorherbestimmten Ort.
Positionseffekte und Silencing können auftreten, wenn das Transgen zufällig in das Genom integriert wird
Transgene Linien können gut bei Fischen, Mäusen, Drosophila und C. elegans angewendet werden
Es dauert sehr lange, bis man eine transgene Linie etabliert hat.
Bei Gain-of-Function-Experimenten wird die Expression eines Gens am richtigen Ort und zur richtigen Zeit aktiviert
Bei der induzierbaren Expression kann von außen gesteuert werden, wann das Gen aktiv wird
Bei der induzierbaren Missexpression wird die Expression des Gens von außen reguliert.
Das erste Transgen in einem 2-Komponenten-System produziert einen künstlichen Transkriptionsfaktor
Der Promotor des zweiten Transgens reagiert nicht auf den Transkriptionsfaktor.
Die Steuerung der Transkriptionsfaktor-Aktivität erfolgt durch Tetracycline
Transposons können verwendet werden, um bestimmte Genabschnitte einzubringen
Zuletzt geändertvor 2 Jahren