Grundprinzip der Gentechnik

Gewünschtes Gen identifizieren, isolieren und vervielfältigen

• Reife mRNA wird mithilfe des Enzyms Reverse Transkriptase in cDNA übersetzt (man braucht DNA für den weiteren Verlauf, DNA enthält normalerweise Introns, aber weil wir zuerst mRNA (keine Introns mehr ) haben, kann diese zurück in eine Intronfreie DNA übersetzt werden)

  (—> bei Eukaryoten)

• Vervielfältigung (PCR): Primer sind komplementär zu den enden des gewünschten DNA Abschnittes - Sie tragen dort sogar eine bestimme Basenabfolge

  • Erkennungsregion für Restriktionsenzyme

DNA auf einen anderen Organismus (Bakterien) übertragen

• Schneiden des gewünschten Gens und des Bakterien Plasmids mit Restriktionsenzymen (sticky ends entstehen)

• Rekombination Mithilfe von Ligasen (Einbau von Wunschgen + Promotor Sequenz) + Einbau eines Resistenzgen

• Rekombinantes Plasmid (Vektor) entsteht

  —> ,,gezähmtes’’ Plasmid

—> Vektor in Bakterium übertragen oder

—> Vektor in die Pflanzenzellen Übertragen (entweder direkte Transfektion ODER Übertragung auf Bakterium, welches anschließen Pflanzenzellen infiziert)

• Mit einer chemischen Behandlung wird die Durchlässigkeit der Bakterienzelle erhöht

Bakterien selektieren

• (wenn erst Bakterium dann Pflanzenzelle, dann Abtötung von Bakterium)

• Die eingeschleusten Plasmide enthalten zusätzlich sogenannte Markergene (Resistenzgen z.B. Antibiotikaresistenz)

• Auf einem Nährboden mit bestimmten Antibiotika können nur noch Bakterien überleben, die das eingeschleuste Plasmid mit Resistenzgen enthalten

• (—> bei Pflanzenzelle: Wachstum der tandgenen Pflanze

• Es stammt aus Viren, deren genetisches Material aus RNA besteht

• mRNA wird mit ihrer Hilfe in cDNA umgeschrieben (Eukaryoten)

• Kurze einsträngige DNA - Stücke

• Ursprünglich aus Bakterien

• Helfen Bakterien eingedrungene Viren-DNA zu entfernen

• Eigene DNA auch vor ihnen geschützt, durch das anhängen von Methylgruppen - Enzyme können diese Region nicht erkennen

• Eigene Promotoren

• Expression von Genen

• Können dupliziert werden

• Werden mit dem gleichen Restriktionsenzym geschnitten wie die cDNA

Eukaryoten:

Prokaryoten: