MG-4

• Vorteile:

  • wenig Wirtsproteine

  • geringe Proteolyseaktivität

  • oxidierendes Milieu -> Disulfidbrücken

  • N-Terminus (Abspaltung Signalpeptid)

• Nachteile:

  • Transport durch innere Membran -> klappt manchmal nicht

  • keine Abspaltung des Signalpeptids

  • periplasmatische Inclusion Bodies

• niedrigere Wachstumstemp

• Chaperone

  • surA, FkpA, DsbA,C (—> pTUM4!)

• unterschiedliche Signalsequenzen

  • PhoA, OmpA/T, PelB

• Koproduktion der Signalpeptidase I (viel hilft viel)

• Koproduktion von Sec-Transportsystem (viel hilft viel)

• SecA,B -> erkennen Signalprotein

• Pore: SecY,G,E -> ATP -> ins Periplasma

• folding chaperone

  • GrpE, GroEL/S

• holding chaperone

  • IbpA/B

  • Hsp31,33

• disaggregating chaperone

  • ClpB

• Allgemeine chaperone

  • FkpA

• Spezielle chaperone

  • SurA -> nur outer membrane proteins

• PPIases

  • SurA -> outer membrance beta-barrel proteins

  • FkpA

• DSB helper chaperone

  • dsbA-, …

Sekretion:

b. Ribosom -> SecB -> SecA,Y Pore -> raus da

c. schon gefaltet raus -> TatABC (nur kleinere Proteine mit twin arginin signal)

Schicksale im Periplasma:

1. Aggregation

2. Abbau

3. Chaperone -> korrekte Struktur

4. DSB-Ausbildung mit dsbA

   1. dsbA sehr unselektiv, können inkorrekte Brücken werden

5. dsbC -> korrektur von falschen DSB

1. Zellaufschluss & Isolierung der Inclusion Bodies

2. Lösung aus Inclusion Bodies und Entfaltung (Harnstoff)

3. Rückfaltung (Dialyse/Rückfaltungspuffer)

• LPS

  • hydrophil (Polysaccharid)

  • lipophil (LipidA)

• Aufschluss von E.Coli -> Zellwand geht kaputt -> LPS frei

• Sehr stabil

  • ph-stabil

  • hitze

• klebt an Proteinen

  • —> führt zu starker Immunreaktion im Menschen

  • bindet an TLR4 (Toll-like-receptor) —> Cytokin ausschütten

• sieht man nicht einfach

• Blut von Pfeilschwanzkrebsen

  • Limulus Amebocyten Lysat (LAL) test

    • wird gelb wenn LPS drin ist