Skiziiere den Lebenszyklus der Baculoviren.
Was sind Baculoviren?
Was kennzeichnet Sf21 bzw. Sf9 und High Five Zellen.
Welche 2 Systeme zur Herstellung rekombinanter Baculoviren gibt es? Welche Vorteile haben sie jeweils.
Wofür werden BEVS genutzt? Was sind Vor-und Nachteile?
Welche Alternativen zum Baculovirus gibt es? Nenne Vorteile.
Was sind merkmale der CHO Zellen? Was ind BHK Zellen?
CHO-Zellen:
immortalisierte Zelllinie aus Ovarien des chinesichen Zwerghamsters
stabil bei 30-37 °C
CO2 benötigt
adhärent oder in Suspension
robustes Wachstum
erfüllen regulatorische bedingungen
sehr ähnliche posttranslationale Modifikationen
Speziesgrenze -> evtl. kontamanitationen unwahrscheinclicher
gut etabliert
hohe Ausbeute (da sehr gut optimiert)
Genom sehr stark verändert zum Original
BHK-Zellen: Baby Hamster Kidney Zellen
Was sind NS0 Zellen?
Ursprung: B-Zelllinie (Myeoloma) Maus
adhärent oder Suspension
sterben in HAT-Medium ohne Fusion -> Fusion mit B-Zellen ist notwendig zum Immortalisieren
Hybridomabildung spezifisch gegen bestimmtes Antigen
Was sind Merkmale von HEK293?
= Human embryonic kidney cells
immortalisiert durch integration zerschnittener Adenovirus 5 DNA
isoliert aus weiblichem Fötus 1972
stabil bei 32-37 °C
benötigt CO2
adhärent und in Suspension
robustes Wachtsum
erfüllen regulatorische Bedingung (aber anfälliger für Virus Kontaminationen)
sehr menschennahe PTMs
hohe Ausbeute
stabile & transiente Systeme bekannt
Wie ist ein genereller Expressionsvektor aufgebaut?
Vergleiche plasmid-basierte transiente und stabile Expression hinsichtlich Merkmale und Ablauf.
Welche Möglichkeiten gibt es ein Plasmid länger haltbar zu lassen?
a) Epstein-Barr Nuclear Antigen (EBNA)
-> bindet an oriPlasmid und verankert Plasmid im Chromatin (haltbar ca. 3 Monate)
b) Large-T-System (Achtung: onkogen)
-> auch Episom-System; Large T bindet an SV40Ori und sorgt für Replikation, bei HEK293T stabil ins Genom integriert
Welche Probleme bei zufälliger Integration ins Genom gibt es?
Welche Lösungen sind möglich?
Welche Möglichkeiten zur stabilen Expression über zielgerichtete Systeme gibt es?
piggyBac-Transposon
-> Cut und Paste, deutlich effizientere Integration, Cargo bleibt intakt und kann groß sein (200kbp)
andere Transposonsysteme
CRISPR/Cas9
Zuletzt geändertvor einem Monat
