Zellzählungen

VB wird mit Brillantkresylblau (Farbstoff in 0,9% Nacl gelöst) versetzt und inkubiert. Damit wird die RNA in den Retikulozyten (Substantia retikulo-garanulo-filamentosa) angefärbt. Anschließend werden in einem Ausstrich die Anzahl der Retikulozyten auf 1000 Erythrozyten ausgezählt. (Supravitalfärbung)

- 50μl VB + 50μl Billantkresylblau in ein Reaktionsgefäß pipettieren

- ca. 30 Minuten inkubieren

- sehr dünnen Ausstrich anfertigen- trocknen lassen

- in 1000 Erythrozyten die Retikulozyten zählen.

5-20 %o

(Absolut 30.000 - 100.000 / µl)

Bei gesteigerter Erythropoese

z.B.:

Kugelzellanämie

AIHA (Autoimmunhämolytische Anämie) und andere hämolytische Anämien

Behandlung mit Vitamin B12 (Retikulozytenkrise)

Malaria

Bei verminderter Erythropoese

z.B.:

Vitamin B12 Mangel

Aplastische Anämie

Leukämien (KM-Verdrängende Prozesse) Chemotherapie, Bestrahlung

Retikulozytenproduktionsindex

Vollblut wird mit Türks-Lösung (3% Essigsäure + Gentianaviolett) verdünnt. Durch die Essigsäure werden die Erythrozyten lysiert und die und die Leukozyten fixiert. Das Gentianaviolett färbt zusätzlich die Zellkerne der Leukozyten an. Anschließend zählt Man die Leukozyten in der Zählkammer mit dem Mikroskop aus.

4.000 bis 10.000 pro µl

• viele bakterielle Infektionen

• Hämatopoetische Erkrankungen

  • CML

  • CLL

  • U.a. Leukämien

• infektiöse Mononukleose= Pfeiffersches Drüsenfieber

• Herzinfarkte, Tumore

• Physiologisch: nach Leistungssport, in der Schwangerschaft, Neugeborene

• Medikamente, Raucher

• bei den meisten Virusinfekten

• Bestimmte bakterielle Infektionen: Thyphus, Tuberkulose

• KM-Schädigungen: Bestrahlung, Zytostatika, Immunsupressiva

• KM-Erkrankungen: Agranulozytose, OMF (Osteomyelo Fibrose)

• Immundefekte

Vollblut wird mit 1%-iger Ammoniumoxalatlösung (hypertone Lösung -> geringerer osmotischer Druck -> Wasser aus Lösung wandert in Ery´s) verdünnt. Durch die Lösung quellen die Thrombozyten auf und werden abgerundet. Die Erythrozyten werden lysiert.

Anschließend werden die Thrombozyten mit der Neubauer Zählkammer unter dem Mikroskop ausgezählt.

• Verdünnung 1:20 (VB : Ammoniumoxalatlösung -> 20µl : 380 µl)

  • in Eppendorf-Hütchen

1. mit der Eppendorf-Pipette erst die Lösung und dann das Vollblut mit einer Kapillare in das Reaktionsgefäß geben (Kapillare außen abwischen und ausspülen) -> ohne Luftblasen homogen mischen

2. 10-15 min zum lysieren stehen lassen (in der Zeit Feuchtekammer und Zählkammer mit Deckglas (Newtonsche Ringe!) vorbereiten

3. Gefäß mischen und Zählkammer befüllen und für 20 min zurück in die Feuchtekammer (Zellen sedimentieren, Kammer bleibt feucht)

=> 5 Gruppenquadrate unter dem Mikroskop auszählen (Mit Phasenkontrast!!)

-> Prüfen: gleichmäßig befüllt?

150.000 - 400.000 /µl

• akute Blutung

• Große OP´s

• Splenektomie

• Essentielle Thrombozythämie

• Sekundär bei myeloproliferativen Erkrankungen

• Knochenmarksschädigungen

• Medikamente

• Bestrahlung

• Heparininduzierte Thrombozytopenie

• Pseudo Thrombozytopenie

• Kälteagglutinine

• Mikrogerinnsel

• EDTA-Unverträglichkeit (-> Satelitenphänomen: Ery lagern sich um neutrophile Granulozyten)

  Abhilfe: Citrat-Röhrchen => Ergebnis + 10% = Thrombozahl

VB wird mit Hayemscher Lösung angemessen verdünnt. Dadurch werden die Erythrozyten stabilisiert und besser Lichtbrechung. Anschließend werden die Erythrozyten in der Zählkammer mit dem Mikroskop ausgezählt.

• in ein 10 ml Plastik-Röhrchen 4 ml Hayemsche Lösung pipettieren -> 20 µl verwerfen und 20µl VB mit Kapillare hinzugeben

• mit Parafilm mischen (direkt vor dem Befüllen der Zellkammer)

• Zellkammer befüllen (ca. 1-3 min in der feuchten Kammer sedimentieren lassen)

• 5 Gruppenquadrate auszählen (in Neubauer improved Zählkammer)

• Frauen: 3,5 - 4,5 x 10 hoch 6 /µl

• Männer: 4,5 - 6,0 x 10 hoch 6 /µl

• Exikkose

• Nierentumor (EPO bildende Zellen)

• Höhenaufenthalte

• Herzinsuffizienz

• Chronische Lungenerkrankungen

• Polycythämia vera

• Doping

• Blutungen (insbesondere chronische)

• Anämie

• Hämoglobinopathien

• Knochenmarkinsuffizienz

• Niereninsuffizienz

• Verdünnungsfehler

  • Pipettierfehler der Verdünnungsflüssigkeit

  • Kapillare nicht sauber abgewischt

• Probe nicht gut gemischt

• Probe nicht direkt vor Befüllen der Zählkammer gemischt

• Zählkammer richtig befüllen (Luftblasen, Deckglas, Überlauf)

• Ausreichende Sedimentationszeit beachten

• Fingerabdrücke auf Deckglas vermeiden

• falsche Fläche/ falsche Zellen gezählt

• Nicht schnell genug gezählt (Zählkammer trocknet ein)

• Falsche Berechnung

• Verwechslung mit Bakterien

• Wandern der Thrombozyten -> werden eventuell doppelt gezählt

• Aggregatbildung -> ungenau

• Sedimentierzeit zu gering, nicht alle Thrombozyten werden in einer Schicht erfasst