KC praktisch

• Programm 3

• Wellenlänge 405nm

500 µl Reagenz; 50 µl Probe

Kinetischer Test nach Szasz/Persijn

L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + Glyclyglycin

-> Gamma-GT->

Gamma-glutamyl-Glycylglycin + 5-Amino-2-nitrobenzoate

• Differentialdiagnose und Verlaufsbeurteilung von Leber- und Gallenwegserkrankungen

• Screening auf Leber- und Gallenwegserkrankungen im Muster mit ASAT und ALAT

• Kontrolle des chronischen Alkoholabusus in Kombination mit anderen Laboruntersuchungen

Werte nicht im Referenzbereich

Verdacht auf Leber/Gallenwegserkrankung

• intra+ extrahepatische Cholestase

• Cholangitis

• cholestatische Verlaufsform einer akuten Virushepatitis

• alkoholtoxische Hepatitis

• toxische Leberschädigung

  ->GPT; GOT, Bilirubin

• chronisch aktive Hepatitis

• Leberzirrhose

• Lebertumore

• Lebermetastasen

• Leberschädigung durch Pharmaka

• akute und chronische Pankreatitis

  ->Lipase, Amylase (Pankreatitis) , Tumormarker

• unkomplizierte Virushepatitis

• chronischer Alkoholabusus

• Fettleber

• Leberstauung, Leberabszesss, Lebertumor, Lebermetastasen

->Tumormarker, Billirubin

Männer                   <60 U/I

13-19 Jahre            <40 U/I

Frauen                     <40U/I

13-19                       <30 U/I

• Ascorbinsäure über 30 mg/dl

• Bilirubin über 40 mg/dl

• Hämoglobin über 400 mg/dl

• Triglyceride über 2000 mg/dl

• Erhöhte Werte bei oralen Kontrarezeptiva (von Norgestel + Lenorgestrel)

Programm 2, 340 nm

Luft; 50 µl Probe , 500 µl Reagenz

GPT: Optimierter UV-Test nach IFCC

L-Alanin+ 2 -Oxoglutarat ->GPT(ALAT)->

L-Glutamat + Pyruvat

Pyruvat+ NADH+ H+

->LDH->

L-Laktat+ NAD+

GPT:

• Kenngröße einer Leberzellbeschädigung. Verlaufs-Therapiebeurteilung

• Hinweis auf hereditäre Stoffwechselstörung (Hämochromatose)

• Abklärung Ikterus

erhöht bei

• Lebererkrankungen durch hepatotrope Viren (Hepatitis)

• Chronische Lebererkrankungen

• Autoimmune Lebererkrankung

• Leberschäden durch Medikamente, Alkohol, Rauschmittel, Hepatotoxine, toxische Chemikalien am Arbeitsplatz

• Gut/bösartiger Lebertumor

• Miterkrankung der Leber bei systemischen Viruserkrankungen, bakteriellen und parasitären Infektionen

<50 (m) U/l

<35 (w) U/l

GPT:

• Hämolyse: Hb-Konzentration von 2,5 g/l ->führt zu Erhöhung von 10%

• Körpergewicht: Patienten mit hohem BMI

  ->40% erhöhte Enzymaktivität

• Makro-ALT (Komplexe zwischen ALT und Ig)

Programm 1, 340 nm

Luft, 50 µl Probe , 500 µl Reagenz

 Optimierter UV-Test nach IFCC

L-Alanin+ 2 -Oxoglutarat

->GOT(ASAT)->

L-Glutamat + Oxalacetat

Oxalacetat+ NADH+ H+

->MDH ->

L-Malat+ NAD+

• Erkennung, Differenzierung, Verlaufsbeurteilung von Erkrankungen der Leber-und Gallenwege

• Differentialdiagnose von Erkrankungen der Skelett- und Herzmuskulatur

  beim Lungeninfarkt

  hämolytischer Anämie

• Häufiger Alkoholgenuss

• Einnahme bestimmter Medikamente

Erhöht bei:

• Lebererkrankung durch hepatotrope Viren

• Chronische Lebererkrankungen

• Leberstauung, Leberabszess, Lebertumor, Lebermetastasen

• Muskeldystrophie

• Herzinfarkt (keine Organspezifität)

• Lungeninfarkt

• Hämolytische Anämie

GOT <50 (m); <35 (w) U/l

• Hämolyse: falsch hohe Werte (Erys enthalten deutliche Mengen an ASAT)

Kinetischer photometrischer Test nach DGKC

p-Nitrophenylphosphat+ H2O

àAP à

Phostphat + p-Nitrophenol

Erhöht:

1.       Diagnose und Verlauf von Cholastasen

2.       Diagnose und Verlaufsbeurteilung von Skeletterkrankungen

kein Verdacht auf Leber-/Gallenerkrankung oder Skeletterkrankung

• Klinisch bedeutsam ob Erkrankung der AP-Aktivität Leber- oder Skelettbedingt ist)

• Gute Übereinstimmung zwischen beiden Enzymen Leber-AP und GGT

• Erhöhte GGT ->Hinweis auf Leber als Ursprungsort, schließt gleichzeitige Erhöhung der Knochen nicht aus

• Männer: 40 U/l bis 130 U/l

• Frauen: 35 U/l bis 105 U/l

• Bilirubin>15 mg/dl

• Blutentnahme ->falsch negativ  (Citrat, EDTA, Oxalat binden Zink, Mg )

• Hämolyse

• Medikamente

200, 578 nm

Nullabgleich

Auf 0

AD. 10 µl + 500 µl R1 + 300 µl R2 àdirekt messen

Kalibrator wird doppelt bestimmt

Farbtest

1,2-O-Dilauryl-rac-glycero-3-glutarsäure- (6-methylresorufin)-ester 

->Lipase ->

1,2-O-Dilauryl-rac-glycerin + Glutarsäure- (6-methylresorufin)-ester

Glutarsäure- (6-methylresorufin)-ester

-> Spontanzerfall ->

Glutarsäure+ Methylresorrufin

• Nachweis + Ausschluss akute Pankreatitis ( akuter Oberbauchschmerz)

• Nachweis chronische Pankreatitis ( Im Rezidiv)

• Ausschluss einer Pankreasbeteiligung bei abdominellen Erkrankungen + chirurgischen Eingriffen

• Verlaufskontrolle nach ERCP ( endoskopisch retrograder Choledochopankreatikografie)

Messung:

·       Probe + R1 ->5 min inkubieren -> + R2 , mischen -> 1 min inkubieren

Anfangsextinktion messen, 1, 5 min inkubieren -> 2. Messung

Lipase-Aktivität U/l = E2 (Probe)- E2(Probe) / E2 (Kali)-E1 (Kali) x SW Kalibrator

(Kalibratorwert MW)

• Akute Pankreatitis

• Schub einer chronischen Pankreatitis

• Pankreastumore

• Pankreasbeteiligung bei abdominellen Erkrankungen

• Chirurgische Eingriffe nach ERCP ( endoskopisch retrograde Cholangiopankreatikografie)

Bei Parotitis ->a- Amylase + Lipase immer gemeinsam betrachten !

Bis 60 U/l

• Hämolyse

• EDTA, Oxalat, Citrat, Fluorid

6, 405 nm

500 µl A.D.

Kinetischer photometrischer Test

CNPG3 ->a- Amylase ->CNP + G3

• Nachweis+ Ausschluss der akuten Pankreatitis ( bei Oberbauchschmerz)

• Nachweis einer chronischen Pankreatitis im Rezidiv

• Ausschluss einer Pankreasbeteiligung bei abdominellen Erkrankungen oder chirurgischen Eingriffen

• Verlaufskontrolle nach ERCP ( endoskopisch- retrograder Choledochopankreatikografie)

• Parotitis ( Parotitis akuta: Bakterienbedingt, Parotitis epidemia: viral bedingt=Mumps)

• Pankreas-Typ (P-Typ)

• Speicheldrüsentyp (S-Typ)

• P-Typ: pankreasspezifisch

•   S-Typ: Tränen, Schweiß, Muttermilch, Amnionflüssigkeit, Lungen, Hoden, Eileiterepithel

• Akute Pankreatitis

•   Rezidiv einer chronischen Pankreatitis

• Pankreatitis nach ERCP

• Pankreaskarzinome àNUR bei Verschluss des Ductus pankreaticus

• Speicheldrüsenentzündung

• Makroamylasämie

• zur Absicherung: zusätzliche Bestimmung von Lipase (weiteres Pankreas-spezifisches Enzym)

• Höhe der Aktivität im Serum reflektiert nicht die Schwere der Erkrankung

Serum < 95 U/l

• Makroamylasämie

•        EDTA+ Oxalat

Normal

200 578 nm

mit Wasser

Prinzip nach Jendrassik und Grif

Bilirubin+ diazotierte Sulfanylsäure ->neutrales Milieu -> roter Azofarbstoff

Diagnose, Differentialdiagnose, Verlaufsbeurteilung des Ikterus

 E-LW* 10,8 = mg/dl Bilirubin

<1,1 mg/dl

·       Lichtexposition der Probe

200, 546 nm

mit Wasser

Für jede Probe einen Leerwert

·       Nur R1 + R2 , Na-Cl , Probe

·       Mischen genau 5 min RT dunkel inkubieren, E der Probe gegen Probenleerwert ablesen

 E-LW* 14,4= mg/dl Bilirubin

Indirektes: Gesamt- Direktes Bilirubin

<0,3 mg/dl

200, 340 nm

500 mikrol A.D.

Optimierter UV-Test IFCC

Reagenz 5+1

·       3 min Inkub, E1, 1m inkub àE2

E2-E1 * 4130= U/l

Verdacht auf Herzinfarkt

1.       CK-Aktivitätà m>190 U/l, w>170 U/l

2.       CK-MB Aktivität >24 U/l

CK-MB-Aktivität zwischen 6% und 25% der Gesamt CK-Aktivität

       M <190 U/l

·       W<170 U/l

  Hämoglobin

·       Bilirubin

·       Triglyceride

·       Fibringerinnsel

200

500 ul A.D.

Optimierter UV-Test IFCC mit Inhibition der CK-M Untereinheit durch polyklonale AK

Inkub: 5 min ->E1 ->5 min Inkub ->E2

E2-E1 * 4127= U/l

Messfehler

200, 546nm

Alle reagenzien??

Enzymatischer Farbtest mit Cholesterin-Oxidase

Cholesterinester

->Cholesterinesterase (CHE)->

Cholesterin+ Fettsäuren

Cholesterin+ O2

-> Cholesterinoxidase (CHO)->

Cholesten-3-on+ H2O2

2 H2O2+ 4-Aminoantipyrin+ Phenol

-> Peroxidase( POD) ->

Chinonimin+ HCl+ 4 H2O

• Früherkennung eines Arteriosklerose Risikos

• Kontrolle diätischer+ medikamentöser Lipidsenker

5 min/37°C, innerhalb von 30 min Probe+ Std messen

Cholesterin= Konzentration Std. x E(Probe)/ E(Std)

erhöhtes Risiko für KHK

risiko durch erhöhte Cholesterinkonzentration+ Risikofaktoren potenziert

Cholesterinwert= Basisgröße, Hinweis auf Indikation für Fettstoffwechseluntersuchungen

Cholesterin: Bestandteile Zellmembran, Voerstufe Steroidhormone+ Gallensäuren (produziert+ aufgenommen)

Transport über Lipoproteine

• Blutentnahme: 3-minütige Venenstauung ->Erhöhung der Che-Werte um 10%

• Hb

• Bilirubin

Messung von Eiweiß im Serum

Colorimetrischer Test, Biuret-Methode

Eiweiß+ Cu2+ ->alk. Lsg. ->Cu-Eiweiß-Komplex

• nur für Serum+ Plasma verwenden

• ungeeignet für geringe Proteinkonzentrationen in Liquor oder Urin

• Urin: stört durch hohe Harnstoffkonzentration

• nephrotisches Syndrom

• starker Blutverlust

• Sprue

• schwere Verbrennungen

• Salzretentionssyndrime

• Kwashiorkor (akuter Proteinmangel)

• schwere Dehydratation

• multiples Myelom

Messung von Harnsäure

Enzymatischer Farbtest, PAP, Trinder Methode

Harnsäure+ O2+ H2O

->Uricase->

Allatoin+ CO2+ H2O2

2 H2O2+ 4 Aminoantipyrin+ HDCBS

->POD->

Chinonimin- Farbstoff+ 4 H2O

• Verdacht auf Hyperurikämie

• Therapiekontrolle bei Hyperurikämie

Harnsäure= Endprodukt des Purinabbaus

• 80% renale Ausscheidung

• Folgen Hyperurikämie mit Überschreitung des Löslichkeitprodukts für Na-Urat im Blut

  ->Präzipitationen in Gelenken (=Gicht) und/ oder Nieren (Nephrolithiasis, Uratnephropathie)

• w: 2,5-6 mg/dl

• m: 3,5- 7 mg/dl

• EDTA, Oxalat, Citrat (Antikoagulantien) ->hemmen Uricase und führen zu erniedrigten Werten

• vermehrter Fleischkonsum

• vermehrter Zellabbau/Zellumbau ->Leukämie, Chemo

• Krankheiten die die Ausscheidung von Harnsäure über die Niere herabsetzen

  ->Nierenerkrankung, Diabetes

• Medikamente ->Diuretika

• exzessiver Alkoholkonsum

Akute Gicht

• 0,5% der Pat: erleiden 1. Gichtanfall bei 7-9 mg/dl

• 5% der Pat: erleiden 1. Gichtanfall bei mehr als 9 mg/dl

• über 90% der Pat: erleiden 1. Gichtanfall bei mehr als 10 mg/dl

Messung von Harnstoff

• Vollenzymatische UV-Methode (Urease/GLDH)

Harnstoff+ H2O

->Urease->

2 NH4+ + 2 HCO3-

a-Ketoglutarat+ NH4+ NADH

->GLDH->

L-Glutamat+ NAD+ + H2O

• Niereninsuffizienz Nierenschaden (> 75%)

• Nierenversagen

• Überwachung des Proteinstoffwechsels ( in Intensivtherapie bei künstlicher Ernährung)

• Urinproben: Verdünnung 1:100 (A.D.)

• Photometer programm 200

• Wellenlänge 340 nm

• Probe 10 ul, Reagenziengemisch 1000 ul

• E1 nach 30s, E2 nach 60s

• Serum Harnstoff= Sollwert Std. x E(Probe)/ E (Std)

• Urin Harnstoff= Sollwert Std. x E(Probe)/

  E (Std) x100

• Harnstoff(g/24h)= mg Harnstoff/dlx Liter Urin (24h)/100

• Erw.: 17-43 mg/dl abhängig v. Eiweißzufuhr

• Harnstoff= Abbauprodukt Aminosäurestoffwechsel/Proteinstoffwechsel

• Konzentration: stark abhängig von Proteinzufuhr, Proteinabbau, Diurese

• Erst: Einschränkung Nierenfunktion auf < 25%

  ->Anstieg Serumharnstoffkonzentration

  ->weiterer Nierenparameter notwendig

• Fluorid + Ammoniumheparinat stören die Reaktion

Messung von Kreatinin

kinetisch nach Jaffee ohne Enteiweißung

Kreatinin+ Pikrinsäure

->alkalische Lösung ->

Kreatinin-Pikrinsäurekomplex

• Verdacht auf akutes/chronisches Nierenversagen

• Diabetes

• Hyperurikäämie

• Kollagenosen

• vor Diagnostik/Therapie die für normale Nierenfunktion ausgelegt sind

• Urinproben 1:20 mit A.D verdünnen

• P 200, 480-540 nm

• Std 50 ul, 500 ul Reagenz

Serum Kreatinin= Sollwert Std. x E Probe/ E Std

Urin Kreatinin= Sollwert Stdx EProbe/ E Std x 20

• abhängig von Masse+ Alter

  ->Krea-blinder Bereich bis 50% Einschränkung der GFR

  
  

  CAVE!:

• muskulöse Pat.: Kreatinin ist physiologisch erhöht ohne Nierenschaden

• magersüchtige: Kreatinin kann auch bei Nierenschaden normal sein

Erwachsene:

• m: 0,6-1,1 mg/dl

• w: 0,5-0,8 mg/dl

Kinder

• 1-6D: 0,3-1,0 mg/dl

• 7D- 12J: 0,2-0,6 mg/dl

• Bilirubin ab 500 mg/dl

• TG ab 2000 mg/dl

• Ascorbinsäure ab 30 mg/dl

  ->Test ist bis 5 mg/dl im Serum bzw

  250 mg/dl linear im Blut

Messung von Kreatinin

• enzymatischer Farbtest

• PAP-Trinder- Methode

• Zweipunktmessung

• PAP(Phenolderivat Aminophenatin Peroxidase) enzymatisch

• Verdacht auf akutes/chronisches Nierenversagen

• Diabetes

• Hyperurikämie

• Kollagenosen

• vor Diagnostik/ Therapie die für Nierenfunktion ausgelegt ist

• abhängig von Masse+ Alter

• Krea-blinder Bereich bis 50% Einschränkung GFR

• CAVE:

• muskulöse Pat. haben physiologisch erhöhtes Kreatinin ohne Nierenschädigung

• magersüchtige: kann bei Nierenschaden normale Werte haben

• keine wesentliche Beeinflussung von Bilirubin bis 36 mg/dl

• TG> 600 mg/dl

• Glucose > 1000 mg/dl

->Test bis 30 mg/dl linear

->untere Nachweisgrenze: 0,025 mg/dl

Krea Aufg + Urinwert+ Std gegeben

• Berechnung+ Beurteilung einer Kreatinin-Clearance

Kreatinin Jaffee

• geringgradige Nierenfunktionsstörungen

• Verdacht auf Nierenversagen ANV

• Verlaufskontrolle bei Systemkrankheit (Diabetes)

• Kontrolle bei Medikamenteneinnahme

Urin (Krea) (mg/dl) x V (ml)

S(Krea) (mg/dl) x t (Sammelzeit Urin in min)

24h= 1440 min; 18h= 1080 min

Korrekturfaktor

S= √ ((LxM)/3600)) x 1,73 (L= Körpergröße; M= Masse)

• Sammelfehler des Patienten (ungenaue Zeit+ Mengenangabe)

• bei eindeutig hohem Serumkreatinin (>3 mg/dl)

  ->Inulin Clearance folgt

verdünnen 1:10 -> 10+ 990 ul

Messung von Glucose

Enzymatischer Farbtest auf Basis der Trinder-Reaktion

Glucose+ O2+ H2O

->Glucose-Oxidase ->

Gluconsäure+ H2O

2 H2O2+ Phenol+ 4-Amino-Antipyrin ->Peroxidase->

roter Chinoniminfarbstoff+ 4 H2O

• Nachweis von Hypoglycämien

• Nachweis/AUsschluss einer gestörten Glucosetoleranz (OGTT)

• Nachweis/Ausschluss Diabetes mellitus (T1, T2, Gestationsdiabetes)

• Therapiekontrolle bei Diabetes mellitus n.A. (parenterale Ernährung)

• nüchtern Vollblut: 60-100 mg/dl

• nüchtern Serum/Plasma: 55-115 mg/dl

• postprandial: 30- 60 mg/dl höher als nüchtern

• Urin: <0,1 g/24h

• Vollblut ohne Glykolysehemmer ->Glykolyse -> weitere Verstoffwechslung ex vivo

Auftrennung von Serumproteinen

• Trennung von Serumproteinen mittels Elektrophorese

• Proteine -> bei EPHO ->Auftrennung in verschiedene Fraktionen

  ->Albumin, a1, a2, ß, y-Globuline

  ->alle Zusammen: Gesamteiweiß

• Proteine werden zur Auftrennung auf ein Trägermaterial (Agarosegel9 gebracht

• Alkalischer Puffer: Proteine können Protonen abgeben -> negative Ladung

• Gleichstrom: Proteine wandern von Kathode(-Pol) zur Anode (+-Pol)

• Wanderungsgeschwindigkeit der Proteine: abhängig/ Trennung nach Ladung, Molekülgröße+ Trägermaterial

  ->Denaturierung+ FIxierung der Proteine im Gel

  ->bei Entfärbung: Abwaschen des überschüssigen Farbstoffs

  ->endgültige Fixierung durch Trocknung

• lebererkrankungen

• maligne Tumore (Sarkome, maligne Lymphome)

• AK-Mangel

• erhöhte BSG

• nephrotisches Syndrom

• pathologische Gesamteiweiß-Werte

• Luftblasen

• Auftrennzeit nicht beachtet

• zu viel Probenmaterial

• Fehler bei Färbung

• Falshce Auftragsstelle

• Verdünnung bei Serumepho

• Plasma anstelle von Serum (Fibrinogen) verwendet

• Hämolyse: extra-Fraktion in ß-Fraktion

Beschreibung:

• Monoklonale Gammopathie/M-Gradient

Verdacht auf:

• M. Waldenström/Plasmozytom (MM) ->IgA, IgE, IgD

weitere Tests:

• Differentialblutbild

• KM-Punktion

• Immunfixation

Beschreibung:

• Polyklonale Gammopathie ( andere Fraktionen leicht erniedrigt)

• Gammafraktion stark erhöht

Verdacht auf:

• Infekt, v.A. chronische Entzündungen, Autoimmunreaktion

weitere Tests:

• spezifische AK-Suche (z.B. Hepatitis-Ak)

Beschreibung:

• a2-Fraktion stark erhöht, alle anderen erniedrigt

Verdacht auf:

• Inephrotisches Syndrom (Proteinverlust d. Niere)

weitere Tests:

• Krea-Clearance, Nierenparameter

Beschreibung:

• Albumin erniedrigt

• a1+a2 erhöht

Verdacht auf:

• Akute Entzündung (selten) ->Sepsis, Bakterien

weitere Tests:

• kleines Blutbild/ CRR/ BSG (MiBi)

Beschreibung:

• stark erniedrigte Gammafraktion

Verdacht auf:

• AK-Mangel Syndrom (n. Delle schauen)

weitere Tests:

• Immunfixation/ Differentialblutbild

• ab 5% y-Fraktion ->safe AK-Mangel