Praktikum MoBI

Was ist unter gentechnischer Arbeit zu verstehen?

Klausur-Aufgaben

• Diagramm mit Lücken, einzufüllen galt:

  Immortale, mortal, Primärkultur, serielle Passagen

• 3 Bilder und zuordnen:

  Primäre Fibroblasten CHO und Hl-60

• Was ist neben Serum noch enthalten im Medium?

• Man sollte die Einzelnen Schritte der Versuche kennen !! Viele Aufgaben basieren darauf zu wissen wann was gemacht wird

Klausur-Aufgaben

• 3 Merkmale zu Plasmide

• Lebende Zellkonzentration und Gesamtzellzahl bestimmen

Rechenaufgabe

250 ml einer 5 % Lösung soll hergestellt werden. Man hat ein 10% Lösung mit 1000 Liter. Wie soll verdünnt werden?

Was ist ein gentechnisch veränderter Organismus

Was ist ein Vektor?

Was ist der Untersschied zwischen Klonierungsvektor & Expressionsvektor?

Plasmid:

• Vorkommen

• Aifbau

• Besonderheiten

Bestandteile von Plasmid

• ORI

• MCS

• Resistenz

• Wie wird im Praktikum der Plasmidvektor pUC19 aus Bakterienzellen gewonnen?

• Welche Reagenzien werden in welcher Reihenfolge verwendet?

Bestimmung der Nukleinsäurekonzentration im Photometer

Unterschied Klonierung - Klonen

Schritte der Klonierung

Restriktionsverdau & Restriktionsenzyme

• Aufgaben

• Vorkommen

Was ist die Tranformation?

Blau-Weiß-Selektion

• Prinzip

Welche Restriktionsenzyme wurden im Praktikum genutzt & warum?

Agarosegelelektrophorese

• Zusammensetzung

• Aufgabe

Agarosegelelektrophorese

• Ladepuffer DNA-Proben (Funktion)

• Wanderungsrichtung DNA im Agarosegel

• Färbung der DNA im Agarosegel

Agarosegelelektrophorese

• Was ist der Marker?

Welche Methoden gibt es um DNA in Zellen einzubringen?

• Was bedeutet Kompetenz / Chemokompetenz?

Blau-Weiß-Selektion

• Welche Bakterien werden wie gefärbt?

PCR

• Definition

• Einsatzgebiete

• Schritte der PCR

• Welche Reagenzien werden benötigt?

PCR

• Aus was besteht der Mastermix?

• Was sind NTC-Kontrolle & Spezifitätskontrolleß

Blau-Weiß-Selektion

• Welche Ergebnisse erden erwartet bei:

  • E.coli 10F’ mit unverändertem pUC19

  • E.coli 10F’ mit rekombinante pUC19

  • E.coli 10F’ mit Ligationsansatz Negativkontrolle

• Sie erhalten weiße Kolonien, obwohl blaue erwartet wurden. Mögliche Ursachen? Kontrollverdau

Blau-Weiß-Selektion

• Warum sollten blaue & weiße Kolonien gepickt & aus ihnen erneut Plasmid-DNA isoliert & verdaut werden? (Kontrollverdau)

• Welche Resktriktionsenzyme würden sie verwenden?

SDS-Page

• Definition

• Funktion

  
  

Was ist die Coomassie-Färbung?

Was bedeutet “Blotting”? (Western Blot)

Wazu wird Ponceau-Färbung durchgeführt?

Immundetektion

Sammelgel & Trenngel - Funktion

Was sind die Unterschiede zwischen Coomassie & Ponceau-Färbung?

Welche Kultivierungsbedingungen müssen bei humanen Zellkulturen eingehalten werden?

Unterschiede Primärkultur - Zelllinie

Was ist die HaCaT & die HL-60 Zelllinie?

Woraus besteht HaCaT & HL-60 Medium?

Was ist die Trypanblau-Färbung?

Wozu?

1. Wie lauten die Parameter die man verändern kann um Zellen in vitro zum wachsen zu bringen. 4 Stück

2. Was ist FCS/ Was ist Trypsin?

3. Der Luftzug einer Klasse II Werkbank.

Pfeile wurden gegeben. Nur die Pfeilrichtung musste man selber einzeichnen