Altklausuren

• Gehirn: Pineal/ Zirbeldrüse, Hypothalamus, Pituitary/Hirnahngsdrüse​

• Thymus​

• Thyroid/ Schilddrüse​

• Pankreas/ Bauchspeicheldrüse​

• Adrenal/ Nebenniere​

• Ovary​

• Testis

   

  

• Frequenzverschiebung zwischen gesendetem und empfangenem Ultraschallsignal

• bildet Organstrukturen und Blutströmung in den Gefäßen ab

• Gewebe —> MRT

• Knochen —> Röntgen

• (+)ssRNA linear

• SARS-CoV2 —> Severe acute respiratory snydrome coronavirus type 2

• SARS-CoV2 besteht aus mehreren Hüllproteinen

  • Envelope E-Protein: Membrankanal befall im viralen Knospungsprozess

  • Membran M Protein: packen sowie Organisieren der RNA im Viron

  • Nucleoplasmid: Protein, welches die RNA im Inneren bindet und Schutz des Viruses

  • Spike-Protein: Oberflächenprotein, das an Zelloberfläche über transmembrane Rezeptoren bindet

• Wird durch diskontinuierliche Transkription hergestellt ​

• Während Transkription einer minus-Strang RNA transkribiert Polymerase eine bestimmte Länge der RNA, pausiert an einer Transkription-regulating sequence (TSR) und springt von dort zu einer leader-TSR, führt zu einer großen Deletion der urpsürunglichen RNA 

Leaky Scanning ist ein Phänomen, bei dem ein schwaches Initiations-Codon-Triplett auf der mRNA manchmal vom Ribosom während der Translationsinitiation übersprungen wird. ​Die ribosomale Untereinheit 40S setzt das Scannen zu einem anderen Initiationscodon fort. Das schwache Initiationscodon kann ein ACG oder ein ATG in einem schwachen Kozak-Konsenskontext sein. Auf diese Weise kann eine mRNA für mehrere verschiedene Proteine kodieren, wenn sich die AUG nicht im Rahmen befinden, oder für Proteine mit unterschiedlichen N-Termini, wenn sich die AUG im selben Rahmen befinden.

Um die Herausforderungen der Instabilität und der effizienten In-vivo-Aufnahme zu umgehen, wird die hergestellte mRNA so konstruiert, dass sie einer stabilen, vollständig prozessierten reifen mRNA ähnelt, die sich im Inneren von Zellen befindet, und an ein lipidbasiertes Verabreichungssystem gebunden ist, das die effiziente Aufnahme der mRNA durch Zellen erleichtert und nichtinfektiöse Antigene im Körper produziert. Diese molekularen Details ermöglichen es dem Körper, eine robuste und zielgerichtete Antigene Immunantwort zu erzeugen.​mRNA-Impfstoffe haben ein inhärentes Potenzial für eine schnelle, skalierbare Herstellung – alles wichtige Aspekte, die erforderlich sind, um während einer Pandemie schnell und strategisch reagieren zu können.​

• Wirkungsmechanismus von mRNA-Impfstoffe: Einschleusung von mRNA-codierter genetischer Information als Bauplan für Impfstoffe in Zellen geimpfter Personen

• mRna-Aufnahme in Zellen führt zur Impfstoff-Antigensynthese

• mRNA stimuliert Immunsystem des geimpften Individuums und erzeugt eine Immunantwort auf das Impfstoffantigen

• Verschiebung des Leserasters bei der Translation ermöglicht eine Variation an Proteinen, die von einem mRNA-Molekül codiert werden kann​

• Das kontinuierliche Genprodukt wird kotranslational in die Endprodukte gespalten​

• Notwendige Strukturen: Slippery Sequence, Sekundärstruktur der RNA, Spacer-Region​

• Eine slippery sequence ist ein Abschnitt der mRNA die die Wahrscheinlichkeit des Verschiebens des ribosomalen Leserahmens steuert​

• Durch die Sekundärstruktur wird das Ribosom zum Stopp und zur Repositionierung gezwungen → Die Translation startet von der -1 Position erneut​

• IgM: ab der zweiten Woche nachweisbar - IgG: ab der dritten Woche nachweisbar

• Mutation im Spikeprotein, um interaktionsaktive Form zu haben (damit der Impfstoff besser wirkt)​

• prozessierte mRNA (Poly-A-Tail, Cap) ​

• Ein Lipid-Nanopartikel (LNP), das Boten-RNA (mRNA) enthält, dringt durch ein Endosom in eine Zelle ein (rechts). Wenn sich das LNP im sauren Endosom (Mitte) befindet, werden die ionisierbaren Lipide positiv geladen und helfen, das LNP und die mRNA in das Zytoplasma der Zelle freizusetzen. Sobald sie frei ist, wird die mRNA von Ribosomen übersetzt, um Proteine herzustellen (links)​

• weitere Bestandteile:

  • ((4-Hydroxybutyl)azandiyl)bis(hexan-6,1-diyl)bis(2-hexyldecanoat) (ALC-0315)​

  • 2-[(Polyethylenglykol)-2000]-N,N-​

  • ditetradecylacetamid (ALC-0159)​

  • Colfoscerilstearat (DSPC)​

  • Cholesterol​

  • Kaliumchlorid​

  • Kaliumdihydrogenphosphat​

  • Natriumchlorid​

  • Natriummonohydrogenphosphat 2H2O​

  • Saccharose​

  • Wasser für Injektionszwecke

• Besitzen alle gleiche 3‘-Enden aber unterschiedliche 5‘-Enden​

• gemeinsame Lead-Sequenz am 5‘-Ende, die dem 5‘-Ende der Genom-RNA entspricht​

• Steuern Synthese eines einzelnen Proteins​

• Synthese der sgRNA startet an der Leader-Sequenz und wird an unterschiedlichen Stellen im Genom fortgesetzt 

• Werden durch diskontinuierliche Transkription hergestellt ​

• Während Transkription einer minus-Strang RNA transkribiert Polymerase eine bestimmte Länge der RNA, pausiert an einer Transkription-regulating sequence (TSR) und springt von dort zu einer leader-TSR, führt zu einer großen Deletion der ursprünglichen RNA

Die Methode erlaubt die direkte Detektion der PCR-Produkt-Akkumulation über Fluoreszenzfarbstoffe oder Fluoreszenzfarbstoff-markierte Sonden. Das Signal der durch eine Lichtquelle angeregten Fluoreszenzfarbstoffe korreliert dabei quantitativ mit der Menge an PCR-Produkt und kann in Echtzeit (Real-time) dargestellt werden. Hierbei können verschiedene Fluoreszenzfarbstoffe und Sonden zum Einsatz kommen: SYBR Green ist ein nicht-gekoppelter Fluoreszenzfarbstoff und bindet generell an jede doppelsträngige DNA. Bei den sog. TaqMan-Sonden handelt es sich hingegen um für die Ziel-DNA sequenz-spezifische Oligonukleotide, die mit Fluoreszenzfarbstoffen gekoppelt sind. Diese TaqMan-Sonden sind mit zwei Farbstoffen markiert, einem fluoreszierenden Reporterfarbstoffe (z.B: FAM) und einem "Quencher" (z.B. TAMRA). Sobald die Sonde an die Zielsequenz bindet, wird durch die 5'-3'-Exonukleaseaktivität der Polymerase die Sonde hydrolysiert und somit eine steigende Reporter-Fluoreszenz gemessen. Je mehr Amplifikate entstehen, umso stärker wird das Signal des fluoreszierenden Reporterfarbstoffs (Hugget et al. 2005 und Nolan et al. 2006).

• qPCR-Verfahren basieren üblicherweise auf der Detektion von zwei verschiedenen Virusgenen (Dual-Target-Prinzip)​

• die Impfung kodiert für das S-Protein, das nicht durch die qPCR detektiert wird​

• auch wenn nur ein Protein detektiert wird, wird üblicherweise das N-Protein und nicht das S-Protein nachgewiesen

• Spezifität: ​Die Spezifität eines diagnostischen Testverfahrens gibt die Wahrscheinlichkeit an, dass Gesunde, die nicht an der geprüften Erkrankung leiden, im Test auch tatsächlich als gesund erkannt werden

• Sensitivität: ​Die Sensitivität eines diagnostischen Testverfahrens gibt an, bei welchem Prozentsatz erkrankter Patienten die jeweilige Krankheit durch die Anwendung des Tests tatsächlich erkannt wird, d.h. ein positives Testresultat auftritt. ​Sie wird definiert als der Quotient aus richtig positiven Testergebnissen und der Summe aus richtig positiven und falsch negativen Testergebnissen.

• Als Antigen- oder Antikörpertest​

• Probe auf Probenbereich/Samplepad (poröses Papier oder Polymer) - Probe mit Laufmittel breitet sich durch Kapillarkräfte aus​

• Antigentest:​

• Conjugatepad mit AK (Gold beladen) gegen das gesuchte Antigen→ binden das AG falls vorhanden​

• Testline mit AK gegen das AG→ bindet AG-AK-Komplex​

• Kontrolle: AK mit Gold beladen bindet an sekundären AK

• AK Kamelisieren: humane/ murine AK in nanbody verwandeln indem man das interface​

• so gestaltet, dass es auch gegen wasser exponieren kann, um stabilität zu erhöhen→domain​

•  „stolpern“ bei Coronavirus, kompakte Genome, großes Polypeptid, aber dann proteolytisch​

• prozessiert, kein promotor etc mehr nötig

Rechenaufgabe: ​

In einem Land besteht die eine Hälfte aus alten Leuten und die andere Hälfte aus jungen Leuten. Pandemie  Virus tötet ungeschützte Alte mit 5% Wahrscheinlichkeit und Junge mit 0.5% Wahrscheinlichkeit. Alle Alten sind geimpft und haben dadurch selbe Wahrscheinlichkeit zu sterben wie Junge Menschen. Wie hoch ist der Schutzfaktor der Impfung? Kurz Rechenweg wie man auf Lösung kommt. 

• Phase I: Evaluation von Pharmakokinetik, Verträglichkeit und Sicherheit im Menschen. Erste Versuche an gesunden Menschen (vorher nur Tierversuche) ​

• Phase II: „Proof of concept”; Test an erkrankten Personen um die Wirksamkeit zu Überprüfen und die Dosierung und Verträglichkeit zu Evaluieren. ​

• Phase III: Nachweis der signifikanten Wirksamkeit in einer größeren Testgruppe. Evaluation von Nebenwirkungen und Wechselwirkungen mit anderen Medikamenten ​

• Die Leitlinien werden vom Paul-Ehrlich-Institut rausgegeben. ​

• Paul Ehrlich Institut

• Leitlinien erfolgen durch GMP

• Wann: Mutter: Rhesus-negativ ​

• Vater: Rhesus-positiv ​

• Kind: Rhesus-positiv ​

• Bei einer Schwangerschaft kommt es in der Regel nicht zu einer Übertragung von fetalem Blut in den mütterlichen Kreislauf. Bei der Geburt kann es jedoch zur Vermischung kommen und die Mutter bildet AK gegen den Rhesusfaktor. Bei einer zweiten Schwangerschaft können die Anti-D-AK über die Plazenta in den Fetus gelangen und zu einer Lyse der Erythrozyten führen. Verdacht auf Anämie muss Bluttransfusion stattfinden. 

• wenn gezielt ein Bakterienstamm bekämpft werden soll

• GOI/Vector plasmid

• RepCap plasmid

• Helper plasmid

zugelassene Gentherapien:

• Luxturna zur Behandlung erblich bedingter Blindheit mit Mutation im RPE65 Gen

• Zolgensma zur Behandlung der spinalen Muskelatrophie mit Mutation im “survival motor neuron gene 1”

• Zyntelgo, Gentherapie für Patienten ab 12 Jahren mit transfusionsabhängiger beta-Thalassämie (TDT), die keinen