cours1

La chromatine est un enchaînement de nucléosome de nature décondensée portant l’information génétique dans le noyau interphasique (G1, S et G2), contrairement au chromosome qui est de la chromatine condensée.

• linéaire, multiple et par paire chez les eucaryotes

○ permettent une transmission fidèle du patrimoine génétique lors de divisions cellulaires (mitotiques et méiotiques)

○ extrémités des chromosomes leurs apportant une stabilité, une protection et une intégrité

○ vitaux

TTAGGG

Le centromère est le point de constriction principale, il contient une séquence d'ADN répétée spécifique (ADN alpha satellite) et accueille la plateforme pour le kinétochore, qui aide à diviser les chromatides pendant la division cellulaire.

L’échafaudage protéique comprend la condensine et la topoisomérase II, qui maintiennent la condensation du chromosome.

En 4 niveau :

• Territoire chromosomique

• Compartiment chromatinien ( A actif et B inactif)

• Domaines

• Interaction enhancer promoteur

➢ Identification individuelle des chromosomes

➢ Présence de bandes (différentes en fonction de la composition en bases, temps de réplication, conformation, densité de gêne, et de séquence répétée)

○ Bande claires : riche en gène et se répliquent plus tardivement

○ Bandes foncées

Par leurs:

• Taille

• Nombre de bande

• Nomenclature internationale

Taille: du plus grand au plus petit + position du centromère -> permet de former des groupes.

• On peut selon les centromères classifier les chromosomes :

• métacentrique = centromère au milieu

• télocentrique = centromère en haut

• acrocentrique = centromère fortement vers le haut, bras supérieur presque inexistant : CHROMOSOMES 13, 14, 15, 21 ET 22 A RETENIR

IC= P/ P+Q

CHROMOSOMES 13, 14, 15, 21 ET 22

➢ dépister la majorité des anomalies chromosomiques (de nombre, de structure)

○ équilibré=pas de perte de matériel génétique

○ déséquilibré= perte de matériel génétique 9

➢ enmosaïque (cellule unique---cf cours 2)

➢ Attention : si une translocation coupe dans un centromère, aucune technique actuelle ne permet de le voir

➢ On étudie touslestypes de cellules =}siseulementtrès peu de cellules de l’organisme sont malades, on pourra le voir

➢ délais de culture (particulièrement en prénatal)

➢ Mauvaise Résolution ○ 7-10 Mb est le minimum de paires de bases qu’ il faut dans l'anomalie pour la détecter (c’est trop)

➢ analyse subjective (erreurs humaines fréquentes

➢ Repose sur la détection de séquences d’ADN grâce à la propriété de dissociation et de réassociation spécifique des acides nucléiques.

➢ Technique ciblée : améliore la résolution à une centaine de millier de paire de base

➢ Les sondes utilisées correspondent à des séquences d’ADN connues, spécifiques de différentes régions, de séquences uniques, ou de chromosomes entiers.

(Ces sondes sont tout d’abord marquées par un fluorochrome puis cellesci sont mises en contact avec la préparation chromosomique. L’hybridation des sondes nécessite l’ouverture (dénaturation) des molécules d’ADN du chromosome et de la sonde elle-même. L’ensemble est donc chauffé pour être dénaturé puis incubé pendant un certain temps pour laisser la sonde s’hybrider sur les chromosomes métaphasiques et sur les noyaux interphasiques. Ceci permet d’obtenir un signal fluorescent au niveau de la région d’intérêt.)

➢ Cette technique est complémentaire des techniques conventionnelles. Elle est utilisée pour le diagnostic de microremaniements, de remaniements complexes, et pour le diagnostic directsur noyaux interphasiques, en particulier au cours du diagnostic prénatal, sans culture cellulaire préalable

• Sondes répétitifs

• Peinture chromosomique

• Sondes locus spécifique

- Les régions d’ADN répétitif sont les régions hétérochromatiques : centromériques (ADN alpha-satellite) ou bien d’autres régions (hétérochromatine du chromosome Y).

- Les sondes locus spécifiques permettent d’étudier une région en particulier. Elles permettent de mettre en évidence des microremaniements chromosomiques.

- Elles sont utilisées de façon ciblée en fonction des signes cliniques pour le diagnostic de microremaniements récurrents comme le syndrome de DiGeorge ou bien le syndrome de Prader Willi/Angelman (phénotype précis lié à une micro-délétion sur le chromosome 15

Cette technique permet une analyse globale du génome, sans culture cellulaire. Elle repose sur l’hybridation simultanée compétitive et en quantité égale de l’ADN du patient avec un ADN d’un sujet témoin normal, marqués chacun par un fluorochrome différent, et réalisée sur des mitoses normales.

- Sans aucune idée préconçue de l’endroit où peut se situer une anomalie. Elle ne permet donc pas de dépister des anomalies chromosomiques équilibrées.

- à retenir : ANALYSE QUANTITATIVE DE DIFFERENTES REGIONS DU GENOME POUR DIRE SI ON A UNE PERTE OU UN GAIN DE MATERIEL CHROMOSOMIQUE

• Séquence le génome dans son intégralité dans un temps très court

  
  

• 3 approches de diagnostic clinique:

• gène ciblé : pour la mucoviscidose par exemple

• séquençage d’exome : tous les exons du génome

• séquençage du génome entier : montre les remaniements de structures